耶尔森菌检测方法GB/T 14926.3-2001第三方检测机构，GB/T 14926.3-2001国标检测

GB/T 《实验动物 耶尔森菌检测方法》国标检测解析

一、标准基本信息

二、适用范围

本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔、犬和猴等实验动物假结核耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌的检测。

三、检测方法详解

1. 采样

2. 采样部位：回盲部内容物、粪便或肛拭子。

3. 采样原则：严格无菌操作，避免交叉污染。样本应新鲜，具有代表性。

4. 保存与运输：样本需4℃冷藏保存，24小时内送检。超过时限需加保存液冷藏。运输过程需控温，避免剧烈震荡。

5. 分离培养

6. 培养基选择：使用CIN-I琼脂、改良Y琼脂等选择性培养基进行分离培养。

7. 培养条件：将已接种的CIN-I琼脂、改良Y琼脂置25℃培养48小时。

8. 增菌分离培养：对于疑似污染或菌量较少的样本，可采用增菌分离培养法。将已接种的改良磷酸盐缓冲液置4℃培养三周，每周转种CIN-I琼脂和改良Y琼脂平皿一次，共三次，平皿置25℃培养48小时。

9. 菌落特征：耶尔森菌在CIN-I琼脂、改良Y琼脂上形成边缘半透明或透明，中心呈深红色，表面湿润凸起的“牛眼状”菌落。

10. 鉴定

11. 三糖铁试验：耶尔森菌接种于三糖铁培养基，25℃培养24小时，斜面产酸或不产酸，底层产酸，硫化氢阴性。

12. 动力试验：将耶尔森菌接种两支半固体琼脂，其中一支放25℃，另外一支放37℃培养24~48小时后观察结果。25℃培养动力阳性，37℃动力阴性。

13. 其他生化试验：包括赖氨酸脱羧酶试验、鸟氨酸脱羧酶试验、尿素酶试验等，用于进一步鉴定耶尔森菌。

14. 菌体特征：耶尔森菌为革兰阴性球杆菌，大小约为(0.8~6.0)μm×0.8μm。

15. 生化试验：

16. 血清玻片凝集试验：菌体可与相应的免疫血清在玻片上形成肉眼可见的凝集反应。

17. 结果判定

18. 阳性报告：凡符合上述各项检测结果（即菌落特征、菌体特征、生化反应及血清玻片凝集试验均为阳性）者作出阳性报告。

19. 阴性报告：不符合者作出阴性报告。

四、注意事项

1. 采样与运输：采样过程中需严格无菌操作，避免样本污染。样本需及时送检，避免长时间保存导致检测结果不准确。

2. 培养基质量：培养基的制备需严格按照标准要求进行，确保营养供给适配菌株生长。使用前需进行质量验证，确保培养基能支持菌株生长。

3. 生化反应准确性：生化反应需严格按照标准操作程序进行，确保反应条件准确一致。同时，需设置阳性和阴性对照，以判断试验结果的有效性。

4. 血清玻片凝集试验：血清玻片凝集试验需使用正规厂家生产的诊断血清，并查验生产许可证与批次质检报告。试验过程中需设置阳性和阴性对照，以判断试验结果的有效性。