嗜肺巴斯德杆菌检测方法GB/T 14926.12-2001标准检测,GB/T 14926.12-2001第三方检测机构
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GB/T 《实验动物 嗜肺巴斯德杆菌检测方法》标准检测解析
标准编号:GB/T
发布日期:2001年8月29日
实施日期:2002年5月1日
主管部门:科学技术部
归口单位:全国实验动物标准化技术委员会(TC281)
起草单位:中国实验动物学会
标准状态:现行有效(Zui近一次复审于2023年12月28日,结论为继续有效)
替代标准:全部代替GB/T
本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠和兔等实验动物嗜肺巴斯德杆菌的检测。
嗜肺巴斯德杆菌为革兰阴性小杆菌,寄居于啮齿类和兔类的上呼吸道。该菌具有特殊的生化反应,菌体可与相应的免疫血清在玻片上形成肉眼可见的凝集反应,据此可进行该菌的分离培养和检测。检测方法主要包括样本采集、分离培养、生化鉴定及血清学检测等步骤。
样本采集
采集部位:呼吸道分泌物、病灶组织或脓汁等。
采集原则:严格无菌操作,避免交叉污染。样本量要足够,且具有代表性。
保存与运输:样本采集后应尽快送实验室检测。保存时可用合适保存液,低温保存防变质。运输过程中保持适宜温度、湿度,避免震荡、挤压。
分离培养
培养基选择:使用血琼脂平皿等选择性培养基进行分离培养。
培养条件:将接种后的培养基置于(36±1)℃培养18-24小时,观察菌落特征。
菌落特征:嗜肺巴斯德杆菌在血琼脂平皿上形成1-2mm、光滑露滴样或灰白色、不溶血或轻微α-溶血的菌落。
生化鉴定
双糖铁或三糖铁培养基上(36±1)℃培养18-24小时,斜面产酸,底层产酸或不变色,不产气。
乙酸铅纸条法显示硫化氢阳性。
大量接种情况下多数菌株产生靛基质。
明胶液化试验阴性。
硝酸盐还原试验阳性。
尿素酶阳性。
过氧化氢酶阳性。
氧化酶弱阳性。
半固体动力试验阴性。
鉴定项目:包括菌体形态、生化反应等。
菌体形态:革兰阴性小杆菌,两端钝圆并浓染。
生化反应:
血清学检测
检测方法:玻片凝集试验。
操作步骤:取纯化菌液与嗜肺巴斯德杆菌阳性血清混合,2分钟内出现肉眼可见凝集为阳性。
注意事项:血清学方法易与其他巴斯德科菌属产生交叉反应,需结合生化鉴定结果进行综合判断。
阳性报告:凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告。
阴性报告:不符合者作出阴性报告。
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