绿脓杆菌检测方法GB/T 14926.17-2001标准检测，GB/T 14926.17-2001第三方检测机构
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GB/T 《实验动物 绿脓杆菌检测方法》标准检测解析
标准编号：GB/T
发布日期：2001年8月29日
实施日期：2002年5月1日
主管部门：科学技术部
归口单位：全国实验动物标准化技术委员会（TC281）
起草单位：中国实验动物学会
标准状态：现行有效（Zui近一次复审于2023年12月28日，结论为继续有效）
替代标准：全部代替GB/T
本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠和兔等实验动物的绿脓杆菌检测。
绿脓杆菌是革兰阴性杆菌，具有产生绿色色素和氧化酶等生化试验特征。本标准利用这些特征，通过选择性培养基培养、菌体检验和生化试验进行鉴定。
样本采集
采集部位：肛拭子、粪便、分泌物或安乐死后的盲肠内容物。对于环境样本，如实验动物设施设备出风口初效滤膜表面沉积物，需用无菌棉拭子充分采拭。
采集原则：严格无菌操作，防止外界杂菌混入样本。样本应新鲜，避免污染。
保存与运输：样本需4℃冷藏保存，24小时内送检。超过时限需冷冻，解冻后立即检测。
分离培养
培养基选择：使用选择性培养基，如NAC液体培养基和NAC琼脂平皿。这些培养基能抑制其他杂菌生长，有利于绿脓杆菌繁殖。
培养条件：将接种后的培养基置于（36±1）℃培养18-24小时。绿脓杆菌在NAC液体培养基中均匀混浊生长，有菌膜形成，大部分菌株可在培养液上半部形成绿色色素。在NAC琼脂平皿上形成扁平、边缘不齐呈锯齿状、2-3mm的菌落，大部分菌落可产生绿色色素。
鉴定
菌体特征：革兰阴性杆菌，菌体长短不一。
氧化酶试验：阳性。氧化酶试剂与菌体接触后，菌落呈紫色，为阳性反应。
生化试验：对于不产生绿色色素的菌株，需进行生化试验确认。包括葡萄糖氧化发酵试验、硝酸盐还原试验等。绿脓杆菌的葡萄糖氧化发酵试验为氧化型阳性，硝酸盐还原试验阳性（产氮气）。
现代检测技术
PCR法：因灵敏度高、检测周期短（6小时内出结果）被广泛用于阳性复检。PCR法能快速、准确地检测出绿脓杆菌的特异性基因片段。
阳性报告：凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告。即菌体为革兰阴性杆菌，氧化酶阳性，且产生绿色色素或生化试验阳性者，可判定为绿脓杆菌。
阴性报告：不符合者作出阴性报告。
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