肠道病毒71型手足口病源毒含中和剂鉴定消毒技术规范2002版第三方检测机构

在《消毒技术规范（2002年版）》中，针对肠道病毒71型（EV71型）手足口病源毒的含中和剂鉴定消毒技术，需遵循以下核心要点：

一、试验目的

验证中和剂能否有效中和消毒剂对肠道病毒71型手足口病源毒的残留作用，同时确保中和剂对病毒和细胞无不良影响。

二、试验设计原则

1. 科学性：基于科学原理设计试验，确保结果的可靠性和准确性。

2. 可控性：试验过程可控，各因素在试验过程中保持一致。

3. 可追溯性：详细记录试验过程，以便后续分析和验证。

三、试验分组与操作

1. 预备试验：

2. 中和剂+细胞：观察中和剂对细胞生长的影响。

3. （消毒剂+中和剂）+细胞：观察中和产物对细胞生长的影响。

4. 消毒剂+细胞：观察消毒剂对细胞生长的影响。

5. 正式试验：

6. 消毒剂+病毒悬液→接种细胞培养：观察消毒剂对病毒的灭活作用。

7. （消毒剂+病毒悬液）+中和剂→接种细胞培养：观察残留消毒剂被中和后，病毒是否可恢复对细胞的感染作用。

8. 中和剂+病毒悬液→接种细胞培养：观察中和剂对病毒有无抑制作用。

9. （消毒剂+中和剂）+病毒悬液→接种细胞培养：观察中和产物或未被完全中和的残留消毒剂对病毒有无抑制作用或对检测方法有无干扰。

10. 病毒悬液→接种细胞培养：作为阳性对照，观察病毒是否可正常生长。

11. 未接种病毒的细胞→培养：作为阴性对照，观察细胞生长是否正常。

四、病毒悬液制备与消毒试验

1. 病毒悬液制备：将肠道病毒71型手足口病源毒与设定浓度的有机干扰物混合，作为消毒剂灭活试验用病毒悬液。

2. 消毒试验：取病毒悬液加入待检消毒剂，立即混匀并记时。作用至规定时间后，立即取出部分样液，加入经鉴定合格的中和剂中混匀；或用经鉴定合格的除药方法处理。

五、病毒滴度测定与结果评价

1. 病毒滴度测定：采用终点稀释法分别进行病毒滴度测定，计算各组病毒的感染滴度。

2. 结果评价：试验结果符合以下全部条件，所测中和剂可判为合格：

3. 正式试验中特定组无试验病毒或仅有少量试验病毒生长。

4. 正式试验中特定组有较其他组显著为多，但较其他组显著为少的试验病毒生长。

5. 正式试验中特定组病毒生长与原接种量相近。

6. 正式试验中细胞生长正常组细胞生长正常。

7. 预备试验结果显示，中和剂和中和产物在正式试验的Zui高浓度下对细胞生长无影响。

8. 连续3次试验取得合格评价。