腺病毒5型ADV5型定量灭活试验含中和剂鉴定消毒技术规范2002版第三方检测机构

在《消毒技术规范（2002年版）》中，腺病毒5型（ADV5型）定量灭活试验含中和剂鉴定需通过预试验和正式试验，验证中和剂对消毒剂的有效中和作用及对病毒和细胞的无害性，试验重复3次，结果需符合特定条件方可判定为合格。以下为具体检测流程和要点：

一、试验目的

验证中和剂能否有效中和消毒剂对腺病毒5型的残留作用，同时确保中和剂对病毒和细胞无不良影响。

二、试验设计原则

1. 科学性：基于科学原理设计试验，确保结果的可靠性和准确性。

2. 可控性：试验过程可控，各因素在试验过程中保持一致。

3. 可追溯性：详细记录试验过程，以便后续分析和验证。

三、试验分组

1. 预试验分组：

2. 中和剂+细胞：观察中和剂对细胞的生长有无影响。

3. （消毒剂+中和剂）+细胞：观察中和产物溶液对细胞生长有无影响。

4. 消毒剂+细胞：观察消毒剂对细胞生长有无影响。

5. 正式试验分组：

6. 消毒剂+病毒悬液→接种细胞培养：观察所试消毒剂对病毒有无抑制或灭活作用。

7. （消毒剂+病毒悬液）+中和剂→接种细胞培养：观察残留消毒剂被去除后，病毒是否可恢复对细胞的感染作用。

8. 中和剂+病毒悬液→接种细胞培养：观察中和剂对病毒有无抑制作用。

9. （消毒剂+中和剂）+病毒悬液→接种细胞培养：观察中和产物或未被完全中和的残留消毒剂对病毒有无抑制作用或对检测方法有无干扰。

10. 病毒悬液→接种细胞培养：观察病毒是否可正常生长，并将其结果作为阳性对照值。

四、试验步骤

1. 病毒悬液的制备：将腺病毒5型与设定浓度的有机干扰物混合，作为消毒剂灭活试验用病毒悬液。

2. 消毒试验：取病毒悬液加入待检消毒剂，立即混匀并记时。作用至规定时间后，立即取出部分样液，加入经鉴定合格的中和剂中混匀；或用经鉴定合格的除药方法处理。

3. 对照组试验：按照试验分组进行对照试验，观察病毒生长情况。

4. 病毒滴度测定：采用终点稀释法分别进行病毒滴度测定，计算各组病毒的感染滴度。

五、结果评价

试验结果符合以下全部条件，所测中和剂可判为合格：

1. 正式试验中特定组无试验病毒或仅有少量试验病毒生长。

2. 正式试验中特定组有较其他组显著为多，但较其他组显著为少的试验病毒生长。

3. 正式试验中特定组病毒生长与原接种量相近。

4. 正式试验中细胞生长正常组细胞生长正常。

5. 预备试验结果显示，中和剂和中和产物在正式试验的Zui高浓度下对细胞生长无影响。

6. 连续3次试验取得合格评价。