在《消毒技术规范(2002年版)》2.1.1.12中,有机物对杀菌效果影响的测定旨在评估有机物存在时消毒剂对微生物的杀灭能力,为制定消毒剂的实用剂量提供参考,其核心要求与操作程序如下:
一、试验目的
了解有机物对消毒剂杀菌作用的影响规律,为制定消毒剂的实用剂量提供参考。
二、试验器材
菌片与菌悬液:按规范要求和方法制备。
有机物:根据消毒剂的使用对象选择,如酵母粉、血清、蛋白胨等。
中和剂:经中和剂试验鉴定合格。
其他器材:包括恒温水浴箱、冷水浴装置(可放入试管架的容器,以冰水调节水温)、温度计、pH计、(用无菌蒸馏水配制)等。
三、试验微生物的选择
根据所测消毒剂鉴定需要决定。一般情况下,除需用于特定微生物者外,对细菌繁殖体应选择大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,作为革兰阳性与阴性细菌的代表即可;用作灭菌剂,可使用枯草杆菌黑色变种芽孢。
四、消毒液浓度和作用时间的设定
各种因素影响的测定,均用杀灭相应微生物试验所得Zui低有效浓度,和3个~4个作用时间进行杀灭试验。在3个~4个作用时间中,以该Zui低有效浓度所需的Zui短有效时间为第1时间(T),其后的第2时间为第1时间的一倍(2T)。依此,第3时间为3T,第4时间为4T。试验结果应根据需要测出杀灭对数值达5.00(消毒用)的Zui低有效剂量。必要时,可根据需要调整消毒剂浓度或作用时间。若第1时间较长(>30min),可根据情况适当缩短作用时间的组距。对第1时间较短者(<5min),可根据情况适当延长作用时间的组距。
五、试验方法
含有机物菌悬液的配制:
以小牛血清为有机物代表,应设置无小牛血清对照组;含25%小牛血清组;含50%小牛血清组等3组。
以稀释液配制的微生物悬液与无菌小牛血清,按1:1与3:1比例混合,分别配成含50%与25%小牛血清的微生物悬液。此含小牛血清的微生物悬液,可用于悬液定量杀菌试验,亦可滴染菌片进行载体定量试验。
其他有机物按此设计类推。
试验操作:
各组试验应重复3次。
根据需要,选择悬液定量杀灭试验或载体浸泡定量杀灭试验之一进行测定即可。
具体试验程序根据微生物种类可分别参见相关规范条款。
结果计算:
按相应微生物杀灭试验计算杀灭对数值。
六、结果评价
无影响:该组第1个~4个作用时间的试验,对所试微生物杀灭效果均合格。
轻度影响:该组第2个~4个作用时间的试验,对所试微生物杀灭效果合格。
中度影响:该组第3个~4个作用时间的试验,对所试微生物杀灭效果合格。
重度影响:该组只第4个作用时间的试验,对所试微生物杀灭效果合格。
严重影响:全部试验对所试微生物杀灭效果均不合格。为取得消毒或灭菌的有效剂量,需增加消毒液浓度或作用时间,重新进行试验。
七、注意事项
非观察因素稳定:在观察有机物的影响时,除有机物浓度根据需要改变外,其他如温度和pH等因素均应先后一致。
消毒剂选择:不同消毒剂受有机物影响的程度不同。例如,含氯消毒剂、季铵盐类、汞类、过氧化物类消毒剂的消毒作用明显受有机物影响;而烷基化消毒剂(如环氧乙烷、戊二醛及碘和碘伏)受有机物的影响较小。
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