黄陂区饮料中咖啡因含量检测，饮料营养成分检测

gb 5009. 1 39—2014食品安全国家标准饮料中咖啡因的测定

1 范围

本标准规定了可乐型饮料， 咖啡、 茶叶及其固体和液体饮料制品中咖啡因含量的测定方法—高效

液相色谱法。

本标准适用于可乐型饮料， 咖啡、 茶叶及其固体和液体饮料制品中咖啡因含量的测定。

2 原理

可乐型饮料脱气后， 用水提取、 氧化镁净化； 不含乳的咖啡及茶叶液体饮料制品用水提取、 氧化

镁净化； 含乳的咖啡及茶叶液体饮料制品经三氯乙酸溶液沉降蛋白； 咖啡、 茶叶及其固体饮料制品用

水提取、 氧化镁净化； 然后经c 18 色谱柱分离， 用紫外检测器检测， 外标法定量。

3 试剂和材料

注： 除非另有说明， 本方法所用试剂均为分析纯， 水为gb/t 6682规定的一级水。

3. 1 试剂

3. 1 . 1 氧化镁（mgo） 。

3. 1 . 2 三氯乙酸(ccl 3 cooh)。

3. 1 . 3 甲醇（ch 3 oh） ： 色谱纯。

3. 2 试剂配制

三氯乙酸溶液（10 g/l） ： 称取1g三氯乙酸（3.1.2） 于100 ml容量瓶中， 用水定容至刻度。

3. 3 标准品

咖啡因标准品（c 8 h 10 n 4 o 2 ） ： 纯度≥99%。

3. 4 标准溶液配制

3. 4. 1 咖啡因标准储备液（2.0 mg/ml） ： 准确称取咖啡因标准品20 mg（至0.1 mg） 于10ml容量

瓶中， 用甲醇溶解定容。 放置于4℃冰箱， 有效期为六个月。

3. 4. 2 咖啡因标准中间液（200 μg/ml） ： 准确吸取5.0 ml咖啡因标准储备液（3.4.1） 于50ml容量瓶

中， 用水定容。 放置于4℃冰箱， 有效期为一个月 。

3. 4. 3 咖啡因标准曲线工作液： 分别吸取咖啡因标准中间液（3.4.2） 0.5 ml、 1.0 ml、 2.0 ml、 5.0ml、

10.0 ml至10 ml容量瓶中， 用水定容。 该标准系列浓度分别为10.0 μg/ml、 20.0 μg/ml、 40.0μg/ml、

100 μg/ml、 200 μg/ml。 临用时配制。

4 仪器和设备

4. 1 高效液相色谱仪， 带紫外检测器或二极管阵列检测器。

4. 2 天平： 感量为0.1 mg。

4. 3 水浴锅。

4. 4 超声波清洗器。

4. 5 0.45 μm微孔水相滤膜。

5 分析步骤

5. 1 试样制备

5. 1 . 1 可乐型饮料：

a) 脱气： 样品用超声清洗器在40℃下超声5 min；

b) 净化： 称取5 g（至0.001 g） 样品， 加水定容至5 ml（使样品溶液中咖啡因含量在标准曲

线范围内） ， 摇匀， 加入0.5g氧化镁， 振摇， 静置， 取上清液经微孔滤膜过滤， 备用。

5. 1 . 2 不含乳的咖啡及茶叶液体制品： 称取5 g（至0.001 g） 样品， 加水定容至5 ml（使样品溶液

中咖啡因含量在标准曲线范围内） ， 摇匀， 加入0.5g氧化镁， 振摇， 静置， 取上清液经微孔滤膜过滤，

备用。

5. 1 . 3 含乳的咖啡及茶叶液体制品： 称取1 g（至0.001g） 样品， 加入三氯乙酸溶液定容至10 ml

（使样品溶液中咖啡因含量在标准曲线范围内） ， 摇匀， 静置， 沉降蛋白， 取上清液经微孔滤膜过滤，

5. 1 . 4 咖啡、 茶叶及其固体制品： 称取1 g（至0.001g） 经粉碎低于30目的均匀样品于250 ml锥形

瓶中， 加入约200 ml水， 沸水浴30 min， 不时振摇， 取出流水冷却1 min， 加入 5g氧化镁， 振摇， 再

放入沸水浴20 min， 取出锥形瓶， 冷却至室温， 转移至250 ml容量瓶中， 加水定容至刻度（使样品溶

液中咖啡因含量在标准曲线范围内） ， 摇匀， 静置， 取上清液经微孔滤膜过滤， 备用。

5. 2 仪器参考条件

色谱柱： c 18 柱（粒径5μm， 柱长150 mm×直径3.9 mm） 或同等性能的色谱柱。

流动相： 甲醇+水=24+76。

流速： 1.0 ml/min。

检测波长： 272 nm。

柱温： 25℃。

进样量： 10 μl。

5. 3 标准曲线的制作

将标准系列工作液分别注入液相色谱仪中， 测定相应的峰面积， 以标准工作液的浓度为横坐标，

以峰面积为纵坐标， 绘制标准曲线（咖啡因标准色谱图见附录a中图a.1） 。

5. 4 试样溶液的测定

将试样溶液注入液相色谱仪中， 以保留时间定性， 同时记录峰面积， 根据标准曲线得到待测液中

咖啡因的浓度， 平行测定次数不少于两次。