Rac kit 武汉纽斯特
- 供应商
- 武汉纽斯特生物技术有限公司
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- 15002729010
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- 15002729010
- 联系人
- 黄经理
- 所在地
- 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物城B3-3栋3楼
- 更新时间
- 2021-11-29 17:50
1. vasp通过调节rab11依赖性tgf-β受体的质膜靶向来促进肝星状细胞的tgf-β活化
肝l病学第61卷,首1期,第361-374页,2015年1月
2. rab5活性调节glut4分类为胰岛素反应性和非胰岛素反应性内体室:胰岛素抵抗发展的潜在机制。
内分l泌学。 2014年9月; 155(9):3315-28
将裂解液转移到适当大小的试管中,并置于冰上。
如果发生核裂解,则细胞裂解液可能变得非常粘稠,难以移液。如果发生这种情况,可将裂解液通过27?号注射l器针头3-4次以剪切基因组dna。
通过离心10分钟(在4°c下为12,000 x g)清除裂解物。
收集上清液并将样品保存在冰上以备立即使用,或速冻并保存在-70°c以便将来使用。
储存条件
试剂盒的成分在试剂盒的有效期限内必须存放于4°c条件下保存。
试剂(试剂盒内不提供,由实验者自行配置)
1. 刺激和未刺激的细胞裂解物;
2. 蛋白酶抑制l剂;
3. 4 °c 摇杆或者摇床;
4. 0.5 m edta (ph 8.0);
5. 1 m mgcl2;
6. 2x reducing sds-page sample buffer;
7. 电泳和免l疫印迹相关试剂;
8. 免l疫印迹缓冲液tbst (10 mm tris-hcl, ph 7.4, 0.15 m nacl,0.05%
tween-20);
9. 免l疫印迹封闭缓冲液 (tbst containing 5% 脱脂奶粉 or 3% bsa);
10. pvdf或硝l酸纤维素膜;
11. 二抗;
12. ecl 检测试剂;
电泳和转膜
1. 取15ul样品/孔上样17%配体胶。
2. 按照制造商的说明进行sds-page。
3. 按照制造商的说明将凝胶蛋白转到pvdf或硝化纤l维素膜。
免l疫印迹反应和检测(所有步骤都是在室温下进行,rac kit,并不断搅拌)
1. 将pvdf膜浸入甲l醇15s,然后在室温放置5 min晾干。
注意:如果使用的是硝化纤l维素膜,此步省略。
2. 封闭:用tbst缓冲液配制5%的脱脂牛奶或者3%bsa在室温下孵育1h进行封闭,并需要恒定振荡。
3.孵育一抗:用tbst缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%bsa稀释特异性识别cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体(稀释比例为1:50-1:1000,主要根据样品中含有的cdc42蛋白的量),室温下孵育1-2小时,或者4°c条件下过夜孵育。
4. 用tbst缓冲液洗涤膜三次/5min。
5.孵育二抗:(例如羊抗兔igg-hrp),用tbst缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%bsa按1:1000稀释比例稀释后使用,室温下孵育1小时并恒定振荡。
6. 用tbst缓冲液洗涤膜三次/5min。
7. 使用实验者所选择的检测方法进行显色如ecl显色法。
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