武汉纽斯特 Sar1 GTP

当前没有直接测定法来测量arl1 gtpases的激l活。

neweast biosciencesarl1激l活检测试剂盒基于特定于配置的单克l隆抗l体，该抗l体特异性识别arl1-gtp，但不能识别arl1-gdp。鉴于单克l隆抗l体对其抗原的高度亲和力，可以在短时间内进行激l活测定。 该测定法可提供可靠的结果，并具有一致的可重复性。

电泳和转膜

1. 取15ul样品/孔上样17%配体胶。

2. 按照制造商的说明进行sds-page。

3. 按照制造商的说明将凝胶蛋白转到pvdf或硝化纤l维素膜。

免l疫印迹反应和检测（所有步骤都是在室温下进行，sar1-gtp，并不断搅拌）

1. 将pvdf膜浸入甲l醇15s，然后在室温放置5 min晾干。

注意：如果使用的是硝化纤l维素膜，此步省略。

2. 封闭：用tbst缓冲液配制5%的脱脂牛奶或者3%bsa在室温下孵育1h进行封闭，并需要恒定振荡。

3.孵育一抗：用tbst缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%bsa稀释特异性识别cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体（稀释比例为1:50-1:1000，主要根据样品中含有的cdc42蛋白的量），室温下孵育1-2小时，或者4°c条件下过夜孵育。

4. 用tbst缓冲液洗涤膜三次/5min。

5.孵育二抗：（例如羊抗兔igg-hrp），用tbst缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%bsa按1:1000稀释比例稀释后使用，室温下孵育1小时并恒定振荡。

6. 用tbst缓冲液洗涤膜三次/5min。

7. 使用实验者所选择的检测方法进行显色如ecl显色法。

小g蛋白是从属于细胞调节因子中的一个超家族。rho家族是小g蛋白中的一个亚家族，它在细胞运动、细胞分裂以及基因转录中发挥主要作用。而本试剂盒中的cdc42就属于rho亚家族中的一种，cdc42参与生理活动过程中其分子结构会呈现出2种相互转换的形式：与gtp结合的激l活状态和与gdp结合的非活性状态。

目前cdc42蛋白活性的检测主要是依据小gtp酶cdc42可以与p21活化激酶（pak）的p21结合区域（pbd）结合，使pak活化从而发挥生物学功能，进而间接的进行cdc42活性l功能的监测。然而此方法在检测过程中存在着一定的局限性比如gtp水解成gdp的速度过快以及cdc42-gtp结合蛋白与p21结合区域之间较低的亲和力，导致这种检测方法的重复性较差。

武汉纽斯特(多图)-sar1-gtp由武汉纽斯特生物技术有限公司提供。武汉纽斯特生物技术有限公司为客户提供“g蛋白活性,camp和cgmpelisa试剂盒,蛋白点突变”等业务，公司拥有“纽斯特”等品牌，专注于生物化工等行业。，在湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物城b3-3栋3楼的名声不错。欢迎来电垂询，联系人：黄经理。