Rac1 kit 武汉纽斯特公司

电泳和转膜

1. 取15ul样品/孔上样17%配体胶。

2. 按照制造商的说明进行sds-page。

3. 按照制造商的说明将凝胶蛋白转到pvdf或硝化纤l维素膜。

免l疫印迹反应和检测（所有步骤都是在室温下进行，并不断搅拌）

1. 将pvdf膜浸入甲l醇15s，然后在室温放置5 min晾干。

注意：如果使用的是硝化纤l维素膜，此步省略。

2. 封闭：用tbst缓冲液配制5%的脱脂牛奶或者3%bsa在室温下孵育1h进行封闭，并需要恒定振荡。

3.孵育一抗：用tbst缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%bsa稀释特异性识别cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体（稀释比例为1:50-1:1000，主要根据样品中含有的cdc42蛋白的量），室温下孵育1-2小时，或者4°c条件下过夜孵育。

4. 用tbst缓冲液洗涤膜三次/5min。

5.孵育二抗：（例如羊抗兔igg-hrp），用tbst缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%bsa按1:1000稀释比例稀释后使用，室温下孵育1小时并恒定振荡。

6. 用tbst缓冲液洗涤膜三次/5min。

7. 使用实验者所选择的检测方法进行显色如ecl显色法。

arl3（类似arf的3）是一种adp-核糖基化因子（arf）家族蛋白，在n端延伸方面不同于大多数arf家族成员。arl3的核苷酸交换是快速的，rac1 kit，并且与脂质和去污剂无关。 与gdt /gtp结合后，arl3与一系列效应蛋白相互作用，并调节这些效应蛋白的活性，例如人类视网l膜基因4（hrg4），cgmp磷酸二酯酶的δ亚基（pdeδ）和arl2的结合物（bart）。arl3还以可调节的方式结合微管，以通过与色素性视网l膜炎2（rp2）相互作用来改变胞质分裂的特定方面。有人提出，rp2与arl3协同作用，将光感受器中的细胞膜和细胞骨架连接为细胞的一部分

9.收集上清液并在冰上存储样品（约1-2 mg总蛋白）以进行中间使用，或将其冷冻并保存在-70°c下以备将来使用。

储存条件

试剂盒的成分在试剂盒的有效期限内必须存放于4°c条件下保存。

试剂（试剂盒内不提供，由实验者自行配置）

1.  刺激和未刺激的细胞裂解物；

2.  蛋白酶抑制l剂；

3.  4 °c 摇杆或者摇床；

4.  0.5 m edta (ph 8.0)；

5.  1 m mgcl2；

6.  2x reducing sds-page sample buffer；

7.  电泳和免l疫印迹相关试剂；

8.  免l疫印迹缓冲液tbst (10 mm tris-hcl， ph 7.4， 0.15 m nacl，0.05%

tween-20)；

9.  免l疫印迹封闭缓冲液 (tbst containing 5% 脱脂奶粉 or 3% bsa)；

10. pvdf或硝l酸纤维素膜；

11.  二抗；

12.  ecl 检测试剂；

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