灭菌注射用水二氧化碳检测 细菌内毒素化验

细菌内毒素化验

1. 检测方法依据

细菌内毒素化验依据《中国药典》2025年版四部通则1143细菌内毒素检查法进行。该方法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。

2. 细菌内毒素检查用水——灭菌注射用水的特殊要求

灭菌注射用水本身不仅是供试品，还是细菌内毒素检查的关键试剂——细菌内毒素检查用水的药典标准基准。根据通则1143的规定，细菌内毒素检查用水须符合灭菌注射用水标准，同时其内毒素含量有严格的额外要求：

用于凝胶检测技术时，内毒素含量须小于0.015 EU/ml；

用于光度检测技术时，内毒素含量须小于0.005 EU/ml；

且对细菌内毒素检查试验无干扰作用。

因此，灭菌注射用水作为原料药时，其细菌内毒素检查是必检项目；作为细菌内毒素检查用水使用时，其内毒素限值须满足上述更严格的出厂指标。

3. 检测方法分类

通则1143共收载六种细菌内毒素检查方法，按技术原理分为两大类：凝胶法和光度测定法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。

（1）凝胶检测技术：包括凝胶限度法和凝胶定量法，通过观察鲎试剂与内毒素反应后是否形成凝胶来判断内毒素是否超标。凝胶限度法是传统的半定量方法，在所有方法中具有Zui高的结果性。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶限度法结果为准。

（2）光度检测技术：包括动态浊度法、终点浊度法、动态显色法和终点显色法，可实现内毒素的准确定量。光度检测技术灵敏度更高，可以定量测定内毒素的含量。

4. 2025年版药典核心变化要点

根据2025年版《中国药典》的更新，细菌内毒素检测法在核心内容、操作要点等方面无重大修订，主要变化体现在方法分类的细化与规范化。具体包括以下方面：

方法分类细化：2025年版将细菌内毒素检查方法按技术原理细化为6种方法，明确每种方法的操作要点与判定规则，争议时仍以凝胶限度法结果为准；

内毒素限值确认：药品细菌内毒素限值（L）按L=K/M公式计算。对于注射剂，K=5 EU/（kg·h）；人均体重按60kg计算；

Zui大有效稀释倍数（MVD）确定：在试验中供试品溶液被允许达到稀释的Zui大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测；

争议结果处理：当测定结果有争议时，以凝胶限度法结果为准，采用加样量为0.1 ml的凝胶限度试验进行仲裁；

操作规范细化：对反应容器选择、大规格鲎试剂操作、动态显色法参数选择等给出了具体指导。

5. 实验关键条件

鲎试剂：从鲎的血液变形细胞中提取制备的冻干试剂，可与细菌内毒素发生凝集反应；

反应pH条件：供试品溶液和鲎试剂混合后溶液的pH值应在6.0～8.0范围内为宜；

器具处理：耐热器皿常用250℃、至少30分钟干热灭菌法处理，以去除外源性内毒素；

干扰排除：如遇含有β-葡聚糖的样品，应使用去G因子鲎试剂或G因子反应抑制剂来排除假阳性；

内毒素单位：细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示，1 EU与1个内毒素国际单位（IU）相当。

6. 争议结果仲裁

当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶限度法结果为准。对于不同加样量的检验方法，结果如有争议时，可采用加样量为0.1 ml的凝胶限度试验进行仲裁。