食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验GB 4789.7-2013第三方检测机构，食品安全国家标准标准检测

GB 4789.7-2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》规定了食品中副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的检验方法，适用于各类食品中副溶血性弧菌的定性及定量检测。以下是该标准的核心内容：

一、适用范围

适用于食品中副溶血性弧菌的检验，包括生鲜、冷冻、即食海产品及其加工制品，也可扩展至加工环境样品（如设备表面涂抹样、水体样本）及临床腹泻样本。

二、生物学特性

形态：革兰氏阴性杆菌，多形态（弧状、逗点状、球状、丝状、杆状等），无芽孢，单端单鞭毛。

培养特性：嗜盐性，在3%~7%氯化钠浓度中生长旺盛，Zui适生长温度为30~37℃，Zui适pH为7.4~8.0。

致病性：产生耐热直接溶血素（TDH）和耐热相关溶血素（TRH），引发胃肠炎，症状包括恶心、呕吐、腹泻、腹痛等。

三、检验程序

样品采集与制备：

鱼类和头足类：表面组织、肠或鳃。

贝类：全部内容物（贝肉和体液）。

甲壳类：整个动物或中心部分（肠和鳃）。

非冷冻样品：采集后立即置于7~10℃冰箱保存，尽早检验。

冷冻样品：在45℃以下解冻不超过15分钟，或在2~5℃解冻不超过18小时。

取样部位：

匀液制备：称取25g（mL）样品，加入225mL 3%氯化钠碱性蛋白胨水，均质或拍击制成1:10匀液。

增菌：

制备10倍系列稀释匀液。

选择3个适宜稀释度，每个稀释度接种3支含9mL 3%氯化钠碱性蛋白胨水的试管，每管接种1mL，36℃±1℃培养8~18小时。

定性检测：将1:10匀液于36℃±1℃培养8~18小时。

定量检测：

分离：

TCBS琼脂：圆形、半透明、表面光滑的绿色菌落，直径2~3mm，有类似口香糖的质感。

弧菌显色培养基：副溶血性弧菌呈蓝绿色（具体颜色依产品说明）。

取增菌液划线接种于TCBS琼脂或弧菌显色培养基平板，36℃±1℃培养18~24小时。

典型菌落特征：

纯培养：

挑取3个或以上可疑菌落，划线接种于3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板，36℃±1℃培养18~24小时。

初步鉴定：

氧化酶试验：副溶血性弧菌为阳性。

革兰氏染色：革兰氏阴性，多形态，无芽孢，有鞭毛。

3%氯化钠三糖铁琼脂试验：底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深，有动力。

嗜盐性试验：在6%和8%氯化钠浓度中生长旺盛，在0%和10%中不生长或微弱生长。

确定鉴定：

生化试验：使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，检测甘露醇、赖氨酸脱羧酶、MR-VP等反应。

毒力基因检测（可选）：通过PCR检测耐热直接溶血素基因（tdh）和耐热相关溶血素基因（trh）。

四、结果报告

定性结果：报告样品中是否检出副溶血性弧菌。

定量结果：以MPN/g（mL）或CFU/g（mL）报告菌落数，结合限量标准判定是否合格。

五、关键控制点

样品处理：避免交叉污染，严格无菌操作。

培养条件：TCBS琼脂需现用现配，避免蔗糖分解影响结果。

菌落挑取：从培养箱取出TCBS平板后，应尽快（不超过1小时）挑取菌落。

生化鉴定：结合多项生化反应综合判断，避免单一试验误判。

六、应用意义

食品安全监管：评估海产品卫生状况，预防副溶血性弧菌食物中毒。

风险监测：跟踪副溶血性弧菌污染趋势，为防控措施提供依据。

出口检验：符合（如ISO 21872-1），保障食品国际贸易合规性。