食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB 4789.10-2016标准检测，食品安全国家标准第三方检测机构

GB 4789.10-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》规定了食品中金黄色葡萄球菌的检验方法，包括定性检验和定量检验（平板计数法和MPN计数法），以下是详细介绍：

一、适用范围

该标准适用于各类食品中金黄色葡萄球菌的检验。

二、检验方法

1. 定性检验（第一法）

2. 样品处理：称取25g样品至盛有225mL 7.5%氯化钠肉汤的无菌均质杯内，进行均质处理。若样品为液态，则吸取25mL样品至盛有225mL 7.5%氯化钠肉汤的无菌锥形瓶中，振荡混匀。

3. 增菌：将上述样品匀液于36℃±1℃培养18h~24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。

4. 分离：将增菌后的培养物分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板上，进行培养。Baird-Parker平板培养24h~48h，血平板培养18h~24h。

5. 初步鉴定：金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上呈圆形，表面光滑、凸起、湿润，菌落直径为2mm~3mm，颜色呈灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述可疑菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。

6. 确证鉴定：包括染色镜检和血浆凝固酶试验。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5μm~1μm。血浆凝固酶试验中，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。

7. 适用情况：适用于一般食品中金黄色葡萄球菌的定性检测。

8. 检验程序：包括样品处理、增菌、分离、初步鉴定和确证鉴定等步骤。

9. 定量检验

10. 适用情况：适用于金黄色葡萄球菌含量较低的食品。

11. 检验程序：该法结合了增菌和生化鉴定步骤，通过统计阳性管数，查MPN表得出每克（或每毫升）样品中金黄色葡萄球菌的Zui可能数（MPN）。

12. 适用情况：适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品。

13. 检验程序：包括样品稀释、样品接种涂布、典型菌和可疑菌计数、鉴定试验和结果计算等步骤。

14. 样品稀释：称取25g样品置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，进行均质处理，制成1∶10的样品匀液。然后按10倍系列稀释样品匀液。

15. 样品接种涂布：根据对样品污染状况的估计，选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液以0.3mL、0.3mL、0.4mL接种量分别加入三块Baird-Parker平板，然后用无菌涂布棒涂布整个平板。

16. 培养：涂布后，将平板静置10min。如样液不易吸收，可将平板放在培养箱36℃±1℃培养1h；等样品匀液吸收后翻转平板，倒置后于36℃±1℃培养24h~48h。

17. 典型菌和可疑菌计数：选择有典型的金黄色葡萄球菌菌落的平板，且同一稀释度3个平板所有菌落数合计在20CFU~200CFU之间的平板，计数典型菌落数。

18. 鉴定试验：从典型菌落中至少选5个可疑菌落（小于5个全选）进行鉴定试验，分别做染色镜检、血浆凝固酶试验；同时划线接种到血平板36℃±1℃培养18h~24h后观察菌落形态。

19. 结果计算：根据典型菌落数和鉴定试验结果计算每克（或每毫升）样品中金黄色葡萄球菌的数量。

20. 平板计数法（第二法）

21. MPN计数法（第三法）