食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验GB 4789.35-2016第三方检测机构，食品安全国家标准第三方检测机构

适用于各类含活性乳酸菌的食品，如发酵乳制品、益生菌制品、发酵食品等。

不适用于乳酸菌的菌种鉴定（如需鉴定需结合分子生物学或生化方法）。

乳酸菌：一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称，包括乳杆菌属（Lactobacillus）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）和嗜热链球菌属（Streptococcus）。

常规设备：恒温培养箱（36℃±1℃）、冰箱（2℃~5℃）、均质器、天平（感量0.01g）、无菌试管、无菌吸管、无菌锥形瓶等。

培养基：MRS培养基（用于乳酸菌总数测定，需厌氧培养）、MC培养基（用于嗜热链球菌和部分乳酸菌测定，需需氧培养）、蔗糖发酵管、纤维二糖发酵管等。

试剂：革兰氏染色液、莫匹罗星锂盐（化学纯）、半胱氨酸盐（纯度>99%）等。

冷冻样品：在2℃~5℃条件下解冻（时间不超过18h），或在温度不超过45℃条件下解冻（时间不超过15min）。

固体和半固体食品：称取25g样品，置于装有225mL生理盐水的无菌均质杯内，均质1min~2min制成1:10样品匀液；或置于无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min制成1:10样品匀液。

液体样品：吸取25mL样品，放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶中，充分振摇制成1:10样品匀液。

用1mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注入装有9mL生理盐水的无菌试管中，振摇试管或换用无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100样品匀液。

另取1mL无菌吸管，按上述操作顺序做10倍递增稀释，每递增稀释一次即换用1次1mL灭菌吸管或吸头。

乳酸菌总数计数：

根据样品中乳酸菌菌属的不同，选择相应的培养条件（如仅含双歧杆菌属按GB 4789.34规定执行，仅含乳杆菌属按特定操作执行，同时含双歧杆菌属和嗜热链球菌按特定操作执行等）。

培养基倾注后，36℃±1℃厌氧或需氧培养72h±2h，计数平板上的所有菌落数。

双歧杆菌计数：

选择2个~3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。

倾注冷却至48℃的莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐改良MRS培养基，36℃±1℃厌氧培养72h±2h，计数平板上的所有菌落数。

嗜热链球菌计数：

选择2个~3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。

倾注冷却至48℃的MC培养基，36℃±1℃需氧培养72h±2h，计数平板上的所有菌落数。嗜热链球菌在MC琼脂平板上的菌落特征为：菌落中等偏小，边缘整齐光滑的红色菌落，直径2mm±1mm，菌落背面为粉红色。

乳杆菌计数：

选择2个~3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。

倾注冷却至48℃的MRS培养基，36℃±1℃厌氧培养72h±2h，计数平板上的所有菌落数。

菌落计数：

选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。

低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

结果报告：

乳酸菌总数以CFU/g（固体）或CFU/mL（液体）表示。

若所有稀释度的平板均无菌落生长，则以小于1乘以Zui低稀释倍数报告。

无菌操作：样品制备、稀释、接种等全过程均需严格遵循无菌操作程序，避免污染。

培养条件：部分乳酸菌对氧气敏感，需厌氧培养；培养基温度需控制在48℃±1℃，倾注量约为15mL。

特殊样品处理：含益生菌的制品可能需特殊前处理（如中和抑菌物质）。