食品溶血性链球菌检测 副溶血性弧菌测试

GB 4789.11-2014《食品安全国家标准 食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验》：规定了食品中β型溶血性链球菌的检验方法，适用于乳及乳制品、肉及肉制品、速冻食品等各类食品的检测。

样品处理：称取25g（或25mL）样品，加入225mL改良胰蛋白胨大豆肉汤（mTSB），均质后36℃±1℃培养18-24小时。

选择性培养：取增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂平板，36℃±1℃厌氧培养18-24小时，观察菌落形态。

菌落鉴定：

形态学观察：β型溶血性链球菌菌落为灰白色、半透明、光滑、表面突起、圆形、边缘整齐，周围有2-4mm宽、界限分明的无色透明溶血环（β溶血）。

革兰氏染色：革兰氏阳性球菌，呈球形或卵圆形，常排列成短链状。

生化试验：触酶试验阴性，链激酶试验阳性（血浆凝固块在24小时内完全溶解），杆菌肽敏感试验阳性（A群链球菌对杆菌肽敏感）。

定量检测：采用平板计数法，计算具有典型β溶血特征的菌落数，结果以CFU/g（或CFU/mL）表示。

设备：恒温培养箱、生物安全柜、均质器、菌落计数器、显微镜等。

试剂：哥伦比亚CNA血琼脂平板、mTSB培养基、草酸钾血浆、杆菌肽纸片、革兰氏染色液等。

GB 4789.7-2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》：规定了食品中副溶血性弧菌的检验方法，适用于海产品、肉类、蔬菜等食品的检测。

样品处理：称取25g（或25mL）样品，加入225mL碱性蛋白胨水（APW），37℃±1℃增菌6-8小时。

选择性分离：将增菌液涂布于硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂平板，37℃±1℃培养18-24小时，观察菌落形态。

菌落鉴定：

形态学观察：副溶血性弧菌在TCBS平板上形成绿色或蓝绿色菌落，表面光滑，边缘整齐。

生化试验：氧化酶试验阳性，蔗糖发酵试验阴性，明胶液化试验阳性。

分子生物学检测：采用聚合酶链反应（PCR）技术，扩增副溶血性弧菌特异性基因（如tdh、trh基因），提高检测灵敏度和特异性。

定量检测：通过菌落计数或实时荧光PCR定量检测副溶血性弧菌的含量。

设备：恒温培养箱、生物安全柜、PCR仪、离心机、涡旋混合器等。

试剂：TCBS琼脂平板、APW增菌液、氧化酶试剂、蔗糖发酵培养基、PCR引物及探针等。

溶血性链球菌检测：优先采用GB4789.11-2014标准，结合形态学观察、革兰氏染色及生化试验进行鉴定，必要时采用PCR技术提高灵敏度。

副溶血性弧菌检测：推荐采用GB4789.7-2013标准，结合TCBS平板分离及生化试验进行初步鉴定，对于高灵敏度需求，可采用实时荧光PCR技术进行定量检测。