犬细小病毒检测方法GB/T14926.57-2008 5.1标准检测，GB/T14926.57-2008第三方检测机构

GB/T 标准中5.1部分主要规定了采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法进行犬细小病毒（CPV）的血清学检测，以下是详细介绍：

一、检测原理

根据免疫学原理，采用CPV抗原检测犬血清中CPV抗体；或根据CPV在一定的条件下，能凝集猪或恒河猴的红细胞，这种凝集红细胞的能力可被特异性抗体所抑制的原理，检测犬血清中CPV抗体。

二、主要试剂和器材

1. 试剂

2. ELISA抗原：包括特异性抗原和正常抗原。特异性抗原是用CPV感染FK81细胞后制备的，正常抗原则是FK81细胞冻融破碎后获得的上清液。

3. 阳性血清：CPV实验感染或自然感染的犬血清。

4. 阴性血清：无CPV感染、未经免疫的犬血清。

5. 酶结合物：辣根过氧化物酶标记羊或兔抗犬IgG抗体。

6. 猪或恒河猴红细胞。

7. 器材

8. 酶标仪。

9. 37℃培养箱或水浴箱。

10. 冰箱。

三、检测步骤

1. 包被抗原：将特异性抗原和正常抗原分别包被于聚苯乙烯板上，进行孵育和保存。

2. 洗涤：用洗涤液洗去未结合的抗原和杂质。

3. 加样：将待检血清、阳性血清和阴性血清分别加入包被有抗原的孔中，进行孵育。

4. 加酶结合物：加入酶结合物，与血清中的抗体结合，进行孵育。

5. 加底物溶液：加入底物溶液，酶催化底物显色。

6. 终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。

7. 测吸光值：在酶标仪上读取各孔的吸光值。

四、结果判定

1. 基础级犬：接种疫苗后，经ELISA检测抗体效价大于等于1:160判为合格。

2. SPF级犬：不应进行疫苗接种，对阳性检测结果，选用同一种方法或另一种方法重试。如为阳性则判为阳性。

3. 基础级犬群体免疫抗体合格率：免疫抗体合格率=（被检动物抗体阳性数/被检动物总数）×。基础级犬群体免疫抗体合格率大于等于70%以上可判为该犬群免疫合格。