传染性犬肝炎病毒检测方法GB/T 14926.58-2008标准检测，GB/T14926.58-2008第三方检测机构

GB/T 标准中5.1部分规定了采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法进行传染性犬肝炎病毒（ICHV）的血清学检测，以下是该方法的详细介绍：

一、检测原理

根据免疫学原理，采用ICHV抗原检测犬血清中ICHV抗体。具体来说，利用酶标记的抗体与抗原结合的特性，通过酶催化底物显色来检测血清中抗体的存在。

二、主要试剂和器材

1. 试剂：

2. ELISA抗原：包括特异性抗原和正常抗原。特异性抗原是用ICHV感染MDCK细胞后制备的，正常抗原则是MDCK细胞冻融破碎后获得的上清液。

3. 阳性血清：ICHV实验感染或自然感染的犬血清。

4. 阴性血清：无ICHV感染、未经免疫的犬血清。

5. 酶结合物：辣根过氧化物酶标记羊或兔抗犬IgG抗体。

6. 器材：

7. 酶标仪：用于检测ELISA反应的颜色变化，读取吸光值。

8. 37℃培养箱或水浴箱：用于ELISA反应的孵育。

三、检测步骤

1. 包被抗原：将特异性抗原和正常抗原分别包被于聚苯乙烯板上，进行孵育和保存。

2. 洗涤：用洗涤液洗去未结合的抗原和杂质。

3. 加样：将待检血清、阳性血清和阴性血清分别加入包被有抗原的孔中，进行孵育。

4. 加酶结合物：加入酶结合物，与血清中的抗体结合，进行孵育。

5. 加底物溶液：加入底物溶液，酶催化底物显色。

6. 终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。

7. 测吸光值：在酶标仪上读取各孔的吸光值。

四、结果判定

1. 基础级犬：接种疫苗后，经ELISA检测抗体效价大于等于1:160判为合格。

2. SPF级犬：不应进行疫苗接种，对阳性检测结果，选用同一种方法或另一种方法重试，如为阳性则判为阳性。

3. 基础级犬群体免疫抗体合格率：免疫抗体合格率=（被检动物抗体阳性数/被检动物总数）×。基础级犬群体免疫抗体合格率大于等于70%以上可判为该犬群免疫合格。