消毒剂对物体表面消毒 模拟现场试验消毒技术规范 2002版第三方检测机构

在《消毒技术规范》（2002版）中，消毒剂对物体表面消毒的模拟现场试验检测主要关注消毒剂对人工污染于物体表面细菌芽孢的杀灭作用，以下是详细介绍：

一、试验目的

鉴定消毒剂对人工污染于一般物体表面细菌芽孢的杀灭作用，以验证该消毒剂对上述表面消毒的实用剂量。

二、试验器材

1. 芽孢悬液：通常使用枯草杆菌黑色变种（ATCC 9372）芽孢。

2. 中和剂：需经鉴定合格，用于消除试验微生物与消毒剂的混悬液中和微生物表面上残留的消毒剂，使其失去对微生物抑制和杀灭作用。

3. 稀释液：含0.1%吐温80的PBS溶液，用于棉拭涂抹采样后的洗菌。

4. 无菌棉拭：用于涂抹采样。

5. 规格板：用不锈钢材料制备，中央留一5.0cm×5.0cm的空格作为采样部位。

6. 胰蛋白胨大豆琼脂培养基：用于细菌的培养和计数。

三、操作程序

1. 选择消毒对象：以人工染菌实物如桌面、地面、墙壁等为消毒对象。

2. 标定采样区块：用规格板标定2块面积各为25cm²的区块，一供消毒前采样，一供消毒后采样。

3. 染菌：选物品较平的部位，于规格板中央空格内用无菌棉拭沾以芽孢悬液均匀涂抹被试表面的区块。待自然干燥后进行试验。

4. 消毒前采样（阳性对照组）：

5. 将无菌棉拭于含5ml稀释液试管中沾湿。

6. 对阳性对照组区块涂抹采样，每区块横竖往返各8次。

7. 采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管内，振打200次，作用10min。

8. 用稀释液做适当稀释后，作为阳性对照组样本。

9. 消毒处理：

10. 根据说明书中介绍的使用剂量将消毒剂喷雾或涂擦于物体表面进行消毒。

11. 消毒后，将无菌棉拭于含5ml中和剂试管中沾湿。

12. 分别对消毒区块进行涂抹采样，每区块横竖往返各8次。

13. 采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原中和剂试管内，振打200次，作用10min。必要时用中和剂作适当稀释，作为消毒组样本。

14. 阴性对照组：将用过的同批次中和剂、稀释液各1.0ml接种培养基，作为阴性对照组样本。

15. 细菌培养和计数：

16. 将阳性对照组、阴性对照组和消毒组样本，每份吸取1.0ml，以琼脂倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿。

17. 放37℃恒温箱中培养48h，观察Zui终结果。

18. 计算杀灭对数值。

四、评价规定

1. 试验重复次数：试验需重复3次。

2. 阳性对照组：应有较多细菌生长，以证明采样和培养过程的有效性。

3. 阴性对照组：应无菌生长，以排除污染和假阳性的可能性。

4. 消毒合格标准：所有样本的杀灭对数值均需达到一定标准（通常要求杀灭对数值≥3.00，具体根据规范要求执行），可判为消毒合格。