在《消毒技术规范》(2002年版)中,消毒剂对其它表面消毒现场试验的检测主要关注消毒剂对一般物体表面自然菌的杀灭作用,以验证其实用剂量,以下是详细介绍:
一、试验目的
鉴定消毒剂对一般物体(指除食(饮)具、医疗器械等已有专门规定以外的物体)表面自然菌的杀灭作用,以验证消毒剂对上述表面消毒的实用剂量。
二、试验器材
磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mol/L,pH7.2):用于制备菌悬液和稀释液。
中和剂:用于消除试验微生物与消毒剂的混悬液中和微生物表面上残留的消毒剂,使其失去对微生物抑制和杀灭作用的试剂。中和剂需经鉴定合格。
稀释液:含0.1%吐温80的PBS溶液,用于棉拭涂抹采样后的洗菌。
无菌棉拭:用于涂抹采样。
规格板:用不锈钢材料制备,中央留一5.0cm×5.0cm的空格作为采样部位,用于标定采样面积。
胰蛋白胨大豆琼脂培养基:用于细菌的培养和计数。
三、操作程序
选择消毒对象:在使用现场,随机取物体表面(如桌面、台面、门等)作为消毒对象。
标定采样区块:用规格板标定2块面积各为25cm²的区块,一供消毒前采样,一供消毒后采样。
消毒前采样(阳性对照组):
将无菌棉拭于含5ml稀释液试管中沾湿。
对一区块涂抹采样,横竖往返各8次。
采样后,以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管内,震荡20s或振打80次。
做适当稀释后,作为阳性对照组样本。
消毒处理:
根据规定的剂量,将消毒剂喷雾或涂擦于物体表面进行消毒。
消毒作用时间需按照产品说明书或试验要求设定。
消毒后采样(消毒组):
将无菌棉拭于含5ml中和剂试管中沾湿。
对消毒区块涂抹采样,横竖往返各8次。
采样后,以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原采样液试管内,电动混匀器震荡20s或振打80次。
作为消毒组样本。
阴性对照组:将用过的同批次中和剂、稀释液各1.0ml接种培养基,作为阴性对照组样本。
细菌培养和计数:
将阳性对照组、阴性对照组和消毒组样本,每份吸取1.0ml,以琼脂倾注法接种平皿。
每个样本接种2个平皿,放37℃恒温箱中培养48h。
观察Zui终结果,计算杀灭对数值。
四、评价规定
试验重复次数:试验需重复3次。
阳性对照组:应有较多细菌生长,以证明采样和培养过程的有效性。
阴性对照组:应无菌生长,以排除污染和假阳性的可能性。
消毒合格标准:消毒样本的平均杀灭对数值≥1,可判为消毒合格。
五、注意事项
无菌操作:试验操作必须采取严格的无菌技术,以避免污染和假阳性的发生。
对照设置:每次试验均需设阳性和阴性对照,绝不可省略。
采样区块:消毒前后采样(阳性对照组和消毒试验组)不得在同一区块内进行,以避免交叉污染。
棉拭涂抹采样:棉拭涂抹采样较难标准化,为此应尽量使棉拭的大小、用力的均匀、吸取采样液的量、洗菌时敲打的轻重等先后保持一致。
现场样本检测:现场样本须及时检测,室温存放不得超过2h,否则应置4℃冰箱内,但亦不得超过4h。
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