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恒温快速扩增试剂盒常用酶原料有哪些？

逆转录酶逆转录酶又称反转录酶，是一种rna介导的dna聚合酶，其反应过程中体现出三种功能为：以rna作为模板合成互补dna链(complementary dna， cdna)，形成rna:cdna杂交链；发挥rnaseh活性，降解rna:dna杂交链中的rna模板；以cdna作为模板合成第二链dna，形成双链dna（如下图）。其中，rnaseh活性是逆转录酶的一个内在特性，可在合成过程中同时切割rna:cdna杂合链中的rna模板，该特性可能降低逆转录效率，因此在实际应用中，常采用人工改造后的低或无rnaseh活性的逆转录酶。常用的逆转录酶有amv和m-mlv，amv分离自禽类成髓细胞瘤病毒(avian myeloblastosisvirus，试纸条型wlrn8209kit试剂盒公司， amv)，m-mlv逆转录酶分离自莫洛尼氏鼠病毒(moloney murineleukemia virus，mmlv)，荧光型wlrn8209kit试剂盒公司，前者热稳定性优于后者，但amv逆转录酶的rnaseh活性也更强，不利于长片段cdna合成。市面上多使用经基因工程改造过的m-mlv逆转录酶，其热稳定性改进，可在50℃左右工作，同时rnaseh活性进一步减弱，提高了其逆转录效率。

科普｜恒温扩增试剂盒常用酶原料

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切口酶扩增反应(nicking enzyme amplificationreaction，near)是一种基于切刻内切酶切割特性的恒温扩增方法，详细原理可参考啥黑科技可10分钟完成核酸分子检测？。其使用的酶有两种：切刻内切酶：如nt.bstnbi切刻内切酶，wlrn8209kit试剂盒公司，该类酶不同于常规限制性内切酶，其识别特定序列后仅在dna其中一条链上切割形成缺口，并暴露出游离的3’端；dna聚合酶：如vent(exo-) dna聚合酶或bstdna聚合酶，mirawlrn8209kit试剂盒公司，用于dna链合成，同时具有链置换功能。

恒温扩增试剂盒操作步骤

提前30分钟将试剂盒所需组分取出，室温融化。鹿荡混匀。

1).每个干粉反应管加入29.4 ul abuffer (注意:abuffer需完全融化混匀，否则会对实验效果产“生影响) ; 1.每个干粉反应管加入29.4 ulabuffer (注意: abuffer需完全融化混匀，否则会对实验效果产生影响);

2.每个反应管分别加入2 ul上游引物、2 ul下游引物和0.6μ探针(引物和探针浓度为10 μm ，对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中) 

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