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恒温扩增试剂盒设计及储存

荧光探针设计:

在上下游引物中间，设计--段长度为46-52nt与目的片段互补的序列作为荧光探针;

探针序列不与特异性引物识别位点重叠，长度为46-52 nt，序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基。

试剂盒储存:

运输条件:低温运输;

储存条件:储存温度≤-20°c ，避光保存，避免重压、反复冻融:

产品有效期: 12个月。

恒温快速扩增试剂盒常用酶原料

尿dna糖基化酶尿dna糖基化酶(udg酶)又称尿-n-糖基化酶(ung酶)，可水解含尿的单链和双链dna释放出游离尿，而对rna无活性，与dutp搭配使用，可建立成pcr防污染体系。其原理如下：在pcr体系中将dttp部分或全部替换为dutp后，使得反应生成含有du碱基的扩增产物，这些扩增产物不同于天然模板，在进入含有udg酶的反应体系时，可被udg酶识别并切割尿碱基与糖磷酸骨架间的n-糖基键，而经切割后的dna链在碱性或高温条件下易于断裂降解，从而失去被当作模板再扩增的能力，因此可防止扩增子污染（如下图）。市面上的udg酶主要有普通型和热敏型，其中热敏型udg酶在室温条件下即可催化反应，50℃以上加热可使其灭活，胶体金试纸条型wlb8201kit试剂盒公司，防止其降解后续pcr形成的含du扩增产物。虽然udg/dutp体系具有防污染功能，rna型wlb8201kit试剂盒公司，但在实际测试中还得兼顾pcr的效率和灵敏度。一方面需确保pcr扩增产物掺入足够量的尿碱基，荧光型wlb8201kit试剂盒公司，从而可被udg有效切割；另一方面也需要保证反应体系添加的dutp不会明显影响pcr效率，因此dttp和dutp的佳比例需通过优化确定。

科普｜恒温扩增试剂盒常用酶原料

near相关酶

切口酶扩增反应(nicking enzyme amplificationreaction，near)是一种基于切刻内切酶切割特性的恒温扩增方法，详细原理可参考啥黑科技可10分钟完成核酸分子检测？。其使用的酶有两种：切刻内切酶：如nt.bstnbi切刻内切酶，该类酶不同于常规限制性内切酶，其识别特定序列后仅在dna其中一条链上切割形成缺口，wlb8201kit试剂盒公司，并暴露出游离的3’端；dna聚合酶：如vent(exo-) dna聚合酶或bst dna聚合酶，用于dna链合成，同时具有链置换功能。

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