Rac kit 武汉纽斯特

分析原理

neweast biosciences arl1激l活检测试剂盒基于配置特异性抗arl1-gtp从细胞提取物或体外检测活性arl1-gtp水平的单克l隆抗l体gtpγs负载arl1活化分析。简而言之，抗活性arl1小鼠单克l隆抗l体将用含有arl1-gtp的细胞裂解液培养。然后，rackit，绑定的活动arl1将被下拉蛋白质a/g琼脂糖。用抗arl1兔多克l隆抗l体或抗arl1小鼠单克l隆抗l体进行免l疫印迹分析，检测沉淀的活性arl1。

需要但未提供的材料

1刺激性和非刺激性细胞裂解物

2蛋白酶抑制素

4°c摇管器或振动筛

40.5 m edta，ph8.0

51百万氯化镁

62x还原sds-page样品缓冲液

7电泳和免l疫印迹系统

8免l疫印迹洗涤缓冲液，如tbst（10 mm tris hcl，ph 7.4，0.15 m nacl，0.05%

吐温-20）

9免l疫印迹阻断缓冲液（含5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白的tbst）

10pvdf或硝化纤维膜

11次级抗l体

12ecl检测试剂

arf样蛋白1（arl1）是gtpases的ras超家族中的调控性gtpasesarf家族的成员，并且在整个真核生物中都具有高度保守的直系同源基因。 arl1对果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育至关重要。arl1在主要序列，细胞定位和功能（膜运输调节）上与arf1-6较相似，甚至共享几个共同的结合伴侣。除了其在高尔基体/反式高尔基体网络中的膜运输功能中，还有报道表明arl1在酵母中的离子稳态中可能发挥作用。

arf6激l活测定。 经gdp（lane1）或gtpγs（lane 2）处理后，纯化的arf6蛋白被免l疫沉淀。用抗活性arf6单克l隆抗l体进行免l疫沉淀。

1.抗活性arf6，小鼠单克l隆抗l体（货号26918）：一小瓶– 22 μl（1

含50％甘油和0.05％叠氮l化钠的pbs（ph 7.4）中的浓度（mg / ml）。 该抗l体特异性识别所有脊椎动物的arf 6-gtp。

2.蛋白a / g琼脂糖（目录号30301）：一小瓶– 400 μl 50％浆液。

3. 5x测定/裂解缓冲液（目录号30302）：一瓶– 30 ml的250 mm tris-hcl，ph 8，750mmnacl，50 mm mgcl2，5 mm edta，5％triton x-100。

4.抗arf 6，兔多克l隆抗l体（货号21032）：一小瓶– 100 μl（1 mg / ml）

ph 7.4的pbs中含有50％的甘油。

5. 100 xgtpγs（目录号30303）：1瓶– 100 μl，10 mm，使用5 μlgtpγs标记0.5ml细胞裂解液。

6. 100 x gdp（产品目录号30304）：一个样品瓶– 100 μl，100 mm，使用5 μl gdp标记0.5ml细胞裂解物。

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