Active Rac 武汉纽斯特公司

产品描述

一系列结构多样的配体，从光子到大肽，激l活gpcrs来激发它们的生理功能。配体结合的gpcrs，反过来，起到鸟呤核苷酸交换的作用gβγ存在下gα亚基上的gdp与gtp交换的催化因子，导致gα亚单位与gβγ二聚体分离形成两个功能单元（gα和gβγ）。gα和gβγ亚单位都向各种细胞信号通路发出信号。根据顺序与功能同源，g蛋白分为四个家族：gs，gi、gq和g12。增加这些g蛋白的效应器和相互作用蛋白的数量已经被鉴定，生理上g蛋白参与的过程正在增殖。

体外用gtpγs/gdp处理蛋白以用作阳性和阴性的对照

注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的cdc42被激l活，activerac，而在体外用gtpγs处理大约有90%的cdc42被激l活。

1. 准备两个离心管，每个管中各加入0.5 ml的细胞提取物（如果是纯的cdc42蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。

2. 每个管中加入20ul 0.5m edta(终浓度即为20 mm)。

3. 一个管中加入5ul的100x gtpγs（终浓度即为100 um）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100xgdp（终浓度即为1 mm）作为阴性对照。

4. 将离心管置于30°c条件下反应30min并不断搅动。

5. 终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1m mgcl2(终浓度即为60mm)。

分析原理

基于构型特异性抗gα13-gtp的neweast生物科学gα13活化检测试剂盒从细胞提取物或体外检测活性gα13-gtp水平的单克l隆抗l体gtpγs负载gα13活化试验。简单地说，抗活性gα13小鼠单克l隆抗l体用含有gα13-gtp的细胞裂解液培养。结合的活性gα13将被蛋白质a/g琼脂糖。用兔抗α13多克l隆抗l体免l疫印迹法检测沉淀的活性gα13。

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