GB 5009.139-2014《食品安全国家标准饮料中咖啡因的测定》适用于速溶咖啡粉中咖啡因的检测，主要通过高效液相色谱法（HPLC）实现，具体检测流程与关键要点如下：
方法选择GB5009.139-2014规定咖啡因检测可采用高效液相色谱法（HPLC）或紫外分光光度法，但HPLC因灵敏度高、抗干扰能力强，成为速溶咖啡粉检测的shouxuan方法。
检测原理
提取：速溶咖啡粉中的咖啡因通过水或有机溶剂（如甲醇）提取。
净化：使用氧化镁或三溶液去除蛋白质等干扰物质。
分离：通过C18色谱柱分离咖啡因与其他成分。
检测：紫外检测器在272nm波长下测定咖啡因峰面积，外标法定量。
样品制备
称量：准确称取1g速溶咖啡粉（jingque至0.001g），粉碎至粒度低于30目。
提取：将样品置于锥形瓶中，加入200mL水，沸水浴加热30分钟，期间振摇数次。
净化：冷却后加入5g氧化镁，振摇均匀，再次沸水浴加热20分钟。
定容：冷却至室温，转移至250mL容量瓶，加水定容至刻度，摇匀后静置。
过滤：取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，备用。
色谱条件
色谱柱：C18柱（粒径5μm，150mm×3.9mm）或等效柱。
流动相：甲醇+水=24+76（体积比）。
流速：1.0mL/分钟。
检测波长：272nm。
柱温：25℃。
进样量：10μL。
标准曲线绘制
配制咖啡因标准储备液（2.0mg/mL）、中间液（200μg/mL）和工作液（10、40、100、200μg/mL）。
将标准工作液注入HPLC，测定峰面积，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
样品测定
将试样溶液注入HPLC，以保留时间定性，记录峰面积。
根据标准曲线计算试样溶液中咖啡因浓度，平行测定两次，取平均值。
结果计算咖啡因含量（mg/kg）按公式计算：
咖啡因含量=m×1000C×V×1000
其中：
C为试样溶液中咖啡因浓度（μg/mL）；
V为定容体积（mL）；
m为样品质量（g）。
精密度要求
重复性：在重复性条件下，两次独立测定结果的zhiming差值不得超过算术平均值的10%。
回收率：添加回收率范围为90%~110%。
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