中国药典第四部2351真菌毒素测定法核心要点如下：
适用于药材、饮片及中药制剂中以下真菌毒素的测定：
黄曲霉毒素：B₁、B₂、G₁、G₂
其他真菌毒素：赭曲霉毒素A、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、展青霉素、伏马毒素B₁、B₂及T-2毒素。
原理：通过色谱柱分离后，采用柱后衍生法（碘衍生或光化学衍生）增强荧光信号，用荧光检测器检测。
色谱条件：
碘衍生法：衍生溶液为0.05%碘溶液，衍生化泵流速0.3ml/min，温度70℃。
光化学衍生法：使用光化学衍生器（254nm），激发波长360nm（或365nm），发射波长450nm。
填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶（C₁₈）。
流动相：甲醇--水（40:18:42）。
衍生化：
检出限与定量限：
黄曲霉毒素B₁、G₁：检出限0.5μg/kg，定量限1μg/kg。
黄曲霉毒素B₂、G₂：检出限0.2μg/kg，定量限0.4μg/kg。
原理：经色谱分离后，以多反应监测（MRM）模式检测，精准定性定量。
色谱条件：
填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶（C₁₈）。
流动相A：10mmol/L醋酸铵溶液；流动相B：甲醇。
梯度洗脱：按时间程序调整流动相比例。
质谱条件：
离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子模式。
监测离子对及碰撞电压（CE）：根据毒素种类设定（如黄曲霉毒素B₁的母离子313.1，子离子285.1，CE 30V）。
原理：基于抗原与抗体特异性结合反应，通过竞争性免疫吸附测定真菌毒素含量。
步骤：
抗体包被于固相载体，加入样品与酶标抗原，竞争结合抗体。
洗涤后加入底物显色，颜色深浅与真菌毒素含量成反比。
酶标仪测定吸光度值，计算含量。
取样：取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定。
提取：置于均质瓶中，加入氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（转速＞11000r/min），离心5分钟（转速4000r/min）。
稀释与过滤：精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，离心10分钟（转速4000r/min）。精密量取上清液20ml，通过免疫亲和柱，流速每分钟3ml。
洗脱与定容：用水20ml洗脱（必要时先用淋洗缓冲液10ml洗脱，再用水10ml洗脱），弃去洗脱液。用甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.22μm）滤过，取续滤液即得。
淋洗缓冲液制备：称取25g氯化钠、5g碳酸氢钠溶于水中，加入0.1ml吐温-20，用水稀释至1000ml。
操作环境：需在洁净环境中进行，避免再污染。
方法选择：根据毒素种类和检测需求选择合适的方法（如LC-MS/MS适用于多毒素同时筛查）。
第四部2351 , 真菌毒素测定
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