化学品细菌回复突变试验方法GB/T 21786-2025标准检测，GB/T 21786-2025第三方检测机构
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GB/T 21786-2025《化学品 细菌回复突变试验方法》标准检测要点如下：
标准号：GB/T 21786-2025
发布日期：2025年8月29日
实施日期：2025年12月1日
替代情况：替代GB/T 21786-2008
主管部门：国家标准化管理委员会
归口单位：全国危险化学品管理标准化技术委员会
发布单位：国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会
检测对象：适用于检测化学品（有杀菌作用的除外）的致突变性。
检测原理：利用营养缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌等突变体菌株，检测由DNA的一个或数个碱基对的置换、增加或缺失造成的点突变。通过检测试验株中存在的回复突变并恢复合成必需氨基酸的能力，发生回复突变的细菌能在缺乏特定必需氨基酸的条件下生长，而亲代菌株则不能生长，从而检出化学品的致突变性。
常用方法：包括平板掺入法、预培养法、波动法和悬浮培养法等。其中，平板掺入法和预培养法是Zui常用的方法，这两种方法在加入或不加入代谢活化系统的条件下都能进行。
代谢活化系统：为了模拟体内代谢条件，可以加入外源性代谢活化系统（如哺乳动物肝微粒体酶系S9混合液）。但需要注意的是，外源性代谢活化系统不能完全模拟体内代谢条件，因此本试验结果不能为受试物对哺乳动物的致突变和致癌能力提供直接证据。
试验步骤：
细菌培养：使用新鲜的细菌培养物，生长至指数生长晚期或稳定期早期，细菌浓度约为10⁸个/mL。
受试物处理：将受试物与细菌悬液在加入或不加入代谢活化系统的条件下混合。
平板培养：将混合物与顶层琼脂充分混匀，迅速倾入底层琼脂平板上，培养2d~3d。
菌落计数：计数回复菌落数，并与溶剂对照组的自发回复菌落数进行比较。
阳性判定：若受试化合物的回复突变菌落数等于或大于溶剂组的2倍以上，或呈剂量-反应关系，或某一测试点有可重复的阳性结果，则判断受试样品诱变试验阳性。
阴性判定：若受试化合物的回复突变菌落数未达到上述标准，则判断受试样品诱变试验阴性。
细菌选择：应使用对化学品敏感且稳定的菌株，如组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌和色氨酸营养缺陷型大肠杆菌等。
受试物处理：固体受试样品应溶解或混悬于合适的溶剂或赋形剂中，液体受试样品可直接加入测定体系或在处理前适度稀释。
对照设置：每次试验必须设立阴性（溶剂）对照组和阳性对照组，以提供自发回复突变率的背景值和验证试验系统的有效性。
结果重复性：对于模棱两可或可疑的阳性结果，应进行重复试验以确认结果的可靠性。
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