化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定GB/T 7918.2-1987第三方检测机构，GB/T7918.2-1987检测

GB/T 7918.2-1987《化妆品微生物标准检验方法 细菌总数测定》是我国现行的化妆品细菌总数检测基础国标，采用标准平板计数法测定化妆品中需氧及兼性厌氧嗜中温细菌总数，为化妆品卫生学评价提供关键依据。以下是该标准的核心要点：

一、标准基本信息

标准号：GB/T 7918.2-1987

发布日期：1987年5月28日

实施日期：1987年10月1日

主管部门：中国轻工业联合会

归口单位：全国香料香精化妆品标准化技术委员会

起草单位：“化妆品微生物标准检验方法”起草小组

主要起草人：周淑玉

标准状态：现行有效（Zui近一次复审于2024年8月23日完成，结论为继续有效）

二、检测方法原理

标准平板计数法：基于细菌在适宜培养基上生长繁殖形成菌落的特性，通过梯度稀释、涂布培养、计数菌落数量，结合稀释倍数推算化妆品中的细菌总数。

检测对象：在卵磷脂、吐温80营养琼脂上，于37℃培养48h生长的一群嗜中温的需氧及兼性厌氧细菌总数。

三、检测流程与关键要求

样品采集与处理：

取样：从≥2个包装单位取10g/10mL样品，小包装可酌减；保持原包装，无菌操作防二次污染。

供试液制备：用无菌生理盐水稀释，含防腐剂样品需加中和剂（如卵磷脂、吐温80）消除抑菌干扰，稀释后1h内完成注皿。

培养基与试剂：

核心培养基：卵磷脂-吐温80-营养琼脂（蛋白胨20g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂15g、卵磷脂1g、吐温80 7g、蒸馏水1000mL，pH 7.2±0.2）。

辅助试剂：无菌生理盐水、稀释液、中和剂（按需）。

梯度稀释：

取10g/mL样品→加90mL稀释液→做10⁻¹、10⁻²、10⁻³等梯度，摇匀。

注皿培养：选2-3个稀释度，各取1mL加入无菌平皿，倾入约15mL冷却至45℃的培养基，混匀凝固；37℃培养48h。

菌落计数：

若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。

若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。

计数原则：选取平均菌落数在30-300之间的平皿，按规则计算并报告。

特殊情况处理：

结果报告：

当只有一个稀释度的平均菌落数符合30-300范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数。

若有两个稀释度，其平均菌落数均在30-300个之间，则应求出两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于或等于2应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌落数。

若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度Zui高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释度Zui低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300个之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每克或每毫升小于10个。

单位：CFU/g或CFU/mL（colony forming units per gram或colony forming units per milliliter），保留有效数字并注明培养条件。

判定规则：

四、仪器设备与质量控制

仪器设备：

培养基制备与灭菌设备：高压蒸汽灭菌器（121℃灭菌20min，保证培养基与器皿无菌）。

恒温培养箱：控温精度±1℃，确保37℃稳定培养。

膜过滤法辅助设备：针对低菌或含抑菌成分样品，限度仪需支持滤膜（47mm/50mm）适配、压力稳定（0.05-0.08MPa），可搭配中和剂过滤，提升回收率。

无菌设计：过滤杯、管路用316L不锈钢，耐受121℃灭菌；可选一次性无菌杯，杜绝交叉污染。

多联支架：支持平行样同步检测，符合标准重复性要求。

质量控制：

每批次实验需设置空白对照：验证培养基无菌性。

稀释过程需确保菌体分散：避免菌落堆积影响计数准确性。

避免化妆品原料的抑菌现象：使用对照试验以验证结果的准确性。