GB 7918.4-1987《化妆品微生物标准检验方法 绿脓杆菌》国标检测要点如下:
一、标准背景与目的
发布与实施:GB 7918.4-1987于1987年5月28日发布,1987年10月1日实施。
目的:为化妆品中绿脓杆菌的检测提供统一的方法和标准,确保化妆品的微生物安全性。
二、绿脓杆菌的特性与危害
特性:绿脓杆菌在自然界分布甚广,空气、水、土壤中均有存在。对人有致病力,常引起人皮肤化脓感染,特别是烧伤、烫伤、眼部疾病患者被感染后,常使病情恶化,并可引起败血症。
危害:在化妆品卫生标准中规定不得检出绿脓杆菌,因其能产生多种酶与毒素,改变产品理化性质,降低产品质量,对使用者健康构成潜在威胁。
三、检测方法与步骤
增菌培养:
培养基:使用SCDLP液体培养基(或普通肉汤培养基,检验含防腐剂的化妆品时需添加卵磷脂和吐温80)。
操作:取1:10样品稀释液10ml加到90mlSCDLP液体培养基中,置37℃培养18~24h。如有绿脓杆菌生长,培养液表面多有一层薄菌膜,培养液常呈黄绿色或蓝绿色。
分离培养:
培养基:十六烷三甲基溴化铵琼脂平板(或乙酰胺培养基)。
操作:从培养液的薄菌膜处挑取培养物,划线接种在十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上,置37℃培养18~24h。绿脓杆菌在此培养基上菌落扁平无定型,向周边扩散或略有蔓延,表面湿润,菌落呈灰白色,菌落周围培养基常扩散有水溶性色素。在缺乏十六烷三甲基溴化铵琼脂时也可用乙酰胺培养基进行分离,绿脓杆菌在此培养基上生长良好,菌落扁平,边缘不整,菌落周围培养基略带粉红色。
染色镜检:
操作:挑取可疑的菌落,涂片,革兰氏染色,镜检为革兰氏阴性者应进行氧化酶试验。
氧化酶试验:
操作:取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内,用无菌玻璃棒挑取绿脓杆菌可疑菌落涂在滤纸片上,然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基对苯二胺试液,在15~30s之内,出现粉红色或紫红色时,为氧化酶试验阳性。
绿脓菌素试验:
操作:取可疑菌落2~3个,分别接种在绿脓菌素测定用培养基上,置37℃培养24h,加入氯仿3~5ml,充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿液内,待氯仿提取液呈蓝色时,用吸管将氯仿移到另一试管中并加入1N的1ml左右,振荡后,静置片刻。如上层液内出现粉红色到紫红色时为阳性。
硝酸盐还原产气试验:
操作:挑取被检的纯培养物,接种在硝酸盐蛋白胨水培养基中,置37℃培养24h,观察结果。凡在硝酸盐蛋白胨水培养基内的小倒管中有气体者,即为阳性。
明胶液化试验:
操作:取绿脓杆菌可疑菌落的纯培养物,穿刺接种在明胶培养基内,置37℃培养24h,取出放冰箱10~30min,如仍呈溶解状时即为明胶液化试验阳性。
42℃生长试验:
操作:挑取纯培养物,接种在普通琼脂斜面培养基上,放在41~42℃培养箱中,培养24~48h,绿脓杆菌能生长,为阳性。
四、结果判定与报告
判定标准:被检样品经增菌分离培养后,经证实为革兰氏阴性杆菌,氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者,即可报告被检样品中检出有绿脓杆菌。如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为阳性时,仍可报告被检样品中有绿脓杆菌。
五、注意事项
培养基制备:严格按照标准规定的成分和制法配制培养基,确保培养基的质量。
操作规范:检测过程中需严格遵守无菌操作规范,避免交叉污染。
仪器设备:使用符合标准要求的仪器设备,如培养箱、显微镜等,并定期进行校准和维护。
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