在《消毒技术规范》(2002版)中,龟分枝杆菌杀灭试验主要遵循以下规范和要求:
一、试验目的
在实验室内测定消毒剂杀灭悬液中或载体上龟分枝杆菌所需剂量,以验证对龟分枝杆菌的实用消毒剂量。
二、试验器材
试验菌株:龟分枝杆菌脓肿亚种(ATCC 93326)。
培养基:分枝杆菌干燥培养基。
中和剂:根据规范鉴定合格的中和剂,用于消除试验微生物与消毒剂的混悬液中和微生物表面上残留的消毒剂。
其他器材:包括无菌试管、移液器、恒温培养箱、显微镜等必要的试验器材。
三、试验步骤
菌悬液制备:
取冻干菌种管,以无菌操作打开,用毛细吸管吸取适量营养肉汤于管中,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散。
取含5.0~10.0ml MADC肉汤或罗氏肉汤试管,滴入少许菌种悬液,置37℃培养18~24h。
用接种环取第1代培养的菌悬液,划线接种于分枝杆菌培养基平板上,于37℃培养72h。
挑取上述第2代培养物中典型菌落,接种于分枝杆菌培养基斜面,于37℃培养72h,即为第3代培养物。
试验时取第3代斜面培养物,在分枝杆菌琼脂斜面上连续传代,培养方法与第3代相同。取第5~6代的分枝杆菌培养基斜面新鲜培养物(72h),用5.0ml吸管吸取3.0~5.0ml稀释液加入斜面试管内,反复吹吸,洗下菌苔。随后,用5.0ml吸管将洗液移至一含有6~7g玻璃珠的无菌圆锥底试管中,在电动混合器上混合至少5min。然后将菌液吸入到另一试管内制成菌悬液。
消毒剂稀释:按照消毒剂的使用说明或试验要求,将消毒剂稀释至适当浓度。
杀灭试验:
取一定量的菌液,加入等体积的稀释后消毒剂中,充分混匀后置于指定条件下(如温度、时间)进行杀灭试验。
同时设置不加消毒剂的菌液作为对照组。
效果评估:
在杀灭试验结束后,取适量处理后的菌液进行培养,观察并记录菌落生长情况。
通过比较处理组与对照组的菌落数差异,评估消毒剂的杀灭效果。
四、结果评价
产品监督检验:按产品使用说明书指定的使用浓度和作用时间,重复试验3次。悬液定量杀灭试验中各次试验的杀灭对数值均≥4.00,载体定量杀灭试验中各次试验的杀灭对数值均≥3.00,可判定该产品对龟分枝杆菌污染物消毒合格。
产品鉴定检验:按产品使用说明书指定的使用浓度和3个作用时间(Zui短作用时间的0.5倍、Zui短作用时间、Zui短作用时间的1.5倍),重复试验3次。在产品使用说明书规定使用浓度与Zui短作用时间,以及Zui短作用时间的1.5倍时,各次试验的杀灭对数值均应≥4.00。在产品使用说明书规定使用浓度与Zui短作用时间的0.5倍时,允许杀灭对数值<4.00,可判为实验室试验该产品对龟分枝杆菌污染物消毒的有效剂量。
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