磷酸化蛋白做wb与普通的wb区别

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蛋白质印迹（westernblot，wb）是细胞和分子生物学中使用的一项重要技术。通过使用蛋白质印迹，研究人员能够从细胞中提取的蛋白质的复杂混合物中鉴定特定的蛋白质。该技术通过三个步骤来完成此任务：（1）按大小分离，（2）转移到固体载体以及（3）使用适当的一抗和二抗标记目标蛋白以可视化。

与普通蛋白进行wb不同，磷酸化蛋白做wb还需要以下注意几点：

1-.为避免磷酸化蛋白发生脱磷酸化，取样过程要迅速，zuì好在冰上操作，保证样品不变质；|2.在蛋白提取过程中加入磷酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂；|3.适当提高磷酸化蛋白的上样量；|4.若蛋白磷酸化位点为酪氨酸残基，还需要加入1umol的原钒酸钠，且上样前不能煮沸；（5）适当提高磷酸化抗体的浓度；

（6）在封闭过程中采用专用的脱脂奶粉，可保护野生型蛋白底物处于非磷酸化状态，也维护了磷酸化蛋白的磷酸化状态。

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