生活饮用水菌落总数检测，武汉饮用水检测中心

1 生活饮用水检测范围

本标准规定了生活饮用水水质卫生要求、生活饮用水水源水质卫生要求、集中式供水单位卫生要求、二次供水卫生要求、涉及生活饮用水卫生安全产品卫生要求、水质监测和水质检验方法。本标准适用于城乡各类集中式供水的生活饮用水，也适用于分散式供水的生活饮用水。

2 生活饮用水检测规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是标注日期的引用文件，其随后所有的修改（不包括勘误内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的新版本。凡是不注明日期的引用文件，其新版本适用于本标准。

gb 3838 地表水环境质量标准 gb/t 5750 生活饮用水标准检验方法 gb/t 14848 地下水质量标准 gb17051 二次供水设施卫生规范 gb/t 17218 饮用水化学处理剂卫生安全性评价 gb/t 17219生活饮用水输配水设备及防护材料的安全性评价标准 cj/t 206 城市供水水质标准 sl 308 村镇供水单位资质标准 卫生部生活饮用水集中式供水单位卫生规范

4 操作步骤

4.1 样品的稀释

4.1.1 以无菌吸管吸取25 ml样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。

4.1.2用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1ml，沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头不要触及稀释液面)，振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。

4.1.3 按6.4.1.2操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一次1ml无菌吸管或吸头。

4.1.4根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)，在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1ml样品匀液加入两个无菌平皿内。同时分别取1ml稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。4.1.5及时将15ml～20ml冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

4.2 培养

4.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。

4.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(4ml)，凝固后翻转平板，按6.4.2.1条件进行培养。

4.3 菌落计数

可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits,cfu)表示。

4.3.1 选取菌落数在30 cfu～300 cfu之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30cfu的平板记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

检样 25ml样品+225ml稀释液，均质 10倍系列稀释 选择2个～3个适宜样品匀液， 各取1ml分别加入无菌培养皿内每皿中加入15ml～20ml 平板计数琼脂培养基，混匀 计算菌落总数 报告 36℃±1℃ 48h±2h 培养计算各平板菌落数。

4.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。

4.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。