测试盒的结构特点：分前后两排透明方管，每个方管里面有一个特别设计的产气窗，前排三个方管含浓缩的双料lst培养基，后排六个方管，均含单料lst培养基，大肠菌群发酵培养基产气，产气窗内产生气泡,；采用无菌包装，供用户一次性使用；
大肠菌群测试盒操作步骤
gb/t4789.3-2008第一法大肠菌群mpn计数
准备测试盒
●.排气泡：将测试盒前后分别以大约45度角倾斜，必要时可轻轻用力在桌面上敲击数下，以排除产气窗内气泡；并将样品编号填写在盒盖编号位置；
●.开口：将测试盒平放在桌面上，左手揭开活动盒盖，右手持经火焰消毒的专用开口器，冷却后在测试盒每管中间位置连续穿刺开口；
样品的稀释
固体或半固体样品：称取25mg样品，放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1：10的样品匀液。
1、液态样品：用无菌吸管吸取25ml样品，置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。
2、样品匀液的ph值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/l氢氧化钠（naoh）或1mol/l盐酸（hcl）调节。
3、用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入9ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1ml无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的稀释液。
4、根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制作10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1ml无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min.
初发酵试验
按gb/t478903-2008第一法要求，如果样品的接种量为0.1g(或0.1ml)、0.01g(或0.01ml)、0.001(或0.001ml)，则采用单料型大肠菌群测试盒，操作方法如下：
前排三大管内接种1：10的均匀稀释液1ml，后排共六管，其中三管接种1：100的均匀稀释液1ml，另外三管接种1：1000的均匀稀释液1ml，将接种好的测试盒放入托盘内，置36±1℃温箱内，培养48±2h后，产气窗内无气泡者，则可报告为大肠菌群阴性，如产气窗内有气泡者，则进行复发酵试验。
按gb/t4789.3-2008第一法要求，如果样品的接种量为1.0g(或1.0ml)、0.1g(或0. 1ml)、0.01(或0.01ml)，或接种液体样品10ml、1ml、0.1ml则采用双料型大肠菌群测试盒，(注：根据现有的食品卫生质量评价标准的版本，为使按gb/t4789.3-2008第一法检测结果与评价标准一致，适宜选择双料型大肠菌群测试盒)，操作方法如下:
前排三大管内接种1：10的均匀稀释液10ml，后排共六管，其中三管接种1：10的均匀稀释液1ml，另外三管接种1：100的均匀稀释液1ml，将接种好的测试盒放入托盘内，置36±1℃温箱内，培养48±2h后，产气窗内无气泡者，则可报告为大肠菌群阴性，如产气窗内有气泡者，则进行复发酵试验。
复发酵试验-
用接种针从所有48±2h内发酵产气的lst肉汤管中分别取培养物两针移种于煌绿乳糖胆盐（bglb）肉汤管中，置36±1℃温箱内，培养48±2h后，观察产气情况，产气者计为大肠菌群阳性管。
大肠菌群可能数（mpn）的报告
根据大肠菌群阳性管数，查mpn表报告每克（或每毫升)样品中大肠菌群的mpn值。
注意事项：
●在培育箱内拿出装有测试盒的托盘以及观察结果时，应平拿平放，以免由于测试盒的倾向而将阳性管产气窗内气泡排出，而影响结果.