Top10感受态细胞

产品简介

本品为使用大肠杆菌Top10菌株制备的高效化学感受态细胞，转化效率可达108 cfu/μgDNA以上，被广泛用于质粒转化、基因克隆等；可以使用蓝白斑筛选（注：不需额外添加IPTG来诱导lacZ表达）。

产品组成

基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL(StrR) endA1 nupG

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

产品特性

-属于E.coli K12系列，可用于基因克隆等，菌株生长速度较快；

-在进行蓝白斑筛选时，仅需在平板上预先涂布X-gal即可，无需添加IPTG；

-不可用于以T7RNA聚合酶为表达系统的蛋白表达。

质量控制

无外源质粒DNA残留；

化学法转化效率≥108cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80℃中取出，置于冰浴中融化；

2. 将待转化DNA加入到100μL感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育30min；

3. 将离心管置于42℃水浴锅中，不要晃动，热激90s后，立刻置于冰浴中静置2-3min；

4. 向离心管中加入900μL LB或SOC培养基（室温或37℃预热），然后置于37℃摇床复壮45min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于37℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化DNA的总体积不应超过感受态细胞体积的1/10；

3. 加入待转化DNA后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保Zui高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。