免疫荧光实验|免疫荧光检测|免疫荧光实验外包

免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色)，可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。

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实验流程免疫荧光单标记方法

免疫荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子，方法比较简单，只要按照染色步骤去做，通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择，固定液选择的合适与否，可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。

1、所需材料与试剂

a.培养在盖玻片或玻璃培养皿中融合程度达到60%-70%的细胞。

b.一抗、FITC或TRITC标记的二抗。

c.4%多聚甲醛固定液或冷丙酮固定液 (-20℃预冷20 min)。

d.封闭液。

e.0.01mol/LPBS缓冲液。

2、染色方法

a.取出培养有细胞的盖玻片或glass-bottom培养皿，用0.01MPBS洗2-3遍。

b.加入0.3%的Tritonx-100, 37℃,30 rain

c.加入4%多聚甲醛试问固定30 min或冷丙酮4℃固定10 min。

d.正常阻断血清1:20封闭试问20-30min，抑制IgG的非特异性结合。阻断血清必须选择与二抗同一种属的正常血清。

e.去掉正常血清，直接加入一抗，37℃孵育1 h或4℃过夜。抗体以0.01mo/LPBS稀释(理想的抗体浓度需经试验而定)。

f. 0.3%TritonX-100洗5 min，0.01 mol/IPBS洗5 min，0.3% TritonX 5 min，0.01 MPBS洗5 rain。

g.加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。

h.0.3%TritonX-100洗5rain，0.01 mol/LPBS洗5min，0.3% Triton X5min，0.01mol/LPBS洗5 min，用滤纸吸干。

i.90%甘油(PBS配制)封片。

j.激光扫描共焦显微镜下观察，或于4℃避光保存。