五日生化需氧量（BOD₅）测试

五日生化需氧量（BOD₅）是衡量水体中有机污染物含量的核心指标，它反映了在特定条件下，微生物分解水中可生物降解有机物所消耗的溶解氧量。该测试是评估水质污染程度和废水可生化性的重要依据。

 主要测定方法：稀释与接种法

目前，测定水质BOD₅的标准是 HJ 505-2009《水质 五日生化需氧量（BOD₅）的测定稀释与接种法》。该方法根据水样的特性和BOD₅的大致范围，分为以下四种情况：

非稀释法：适用于BOD₅不大于6 mg/L，且含有足够微生物的水样（如部分地表水）。

非稀释接种法：适用于BOD₅不大于6 mg/L，但缺乏足够微生物的水样（如部分工业废水）。

稀释法：适用于BOD₅大于6 mg/L，且含有足够微生物的水样。

稀释接种法：这是Zui常用的方法，适用于BOD₅大于6 mg/L，且缺乏足够微生物的水样（如绝大多数工业废水和生活污水）。

 测定原理与步骤

BOD₅的测定本质上是一个生物化学过程，其核心是测量水样在培养前后溶解氧（DO）的差值。

 测定原理

在（20±1）℃的恒温条件下，将水样或稀释后的水样培养5天。水样中的微生物在分解有机物的过程中会消耗溶解氧。通过电化学探头法或碘量法分别测定培养前后的溶解氧浓度，其差值即为BOD₅值。

 核心操作步骤 (以Zui常用的稀释接种法为例)

准备稀释水与接种液

稀释水： 通常使用蒸馏水或去离子水，经曝气使溶解氧接近饱和（>8mg/L），并加入必要的营养盐（如磷酸盐、镁、氯化钙、氯化铁等）。

接种液： 取自未受污染的生活污水、含有城镇污水的河水或污水处理厂的出水，以提供活性微生物2。

确定稀释倍数

这是实验成功的关键。稀释的目的是确保培养后水样的溶解氧消耗量在合理范围内。

理想范围： 消耗的溶解氧应 不小于2 mg/L，剩余的溶解氧应 不小于2 mg/L，且剩余溶解氧zuihao为初始浓度的 1/3~ 2/3。

确定方法：可根据水样的化学需氧量（COD）、高锰酸盐指数（Iₘₙ）或总有机碳（TOC）的值，通过经验比值来估算BOD₅的期望值，进而确定稀释倍数。

样品准备与培养

按照确定的稀释倍数，用稀释水（或接种稀释水）将水样稀释至预定体积。

将稀释后的水样充满两个BOD培养瓶，确保瓶内无气泡。

立即测定其中一瓶的初始溶解氧浓度（DO₀）。

将另一瓶放入（20±1）℃的恒温培养箱中，避光培养 5天±4小时。

测定终了溶解氧

培养结束后，立即测定培养瓶中水样的剩余溶解氧浓度（DO₅）。

结果计算

BOD₅的计算需要扣除空白样（仅含稀释水和接种液）的消耗，并考虑稀释比例。简化后的计算公式如下：

BOD₅ (mg/L) = × f₂ / f₁

DO₀, DO₅：水样培养前后的溶解氧浓度 (mg/L)

B₀, B₅：空白样培养前后的溶解氧浓度 (mg/L)

f₂：原水样在培养液中所占的比例

f₁：稀释水（或接种液）在培养液中所占的比例