农药登记毒理学试验方法 第5部分：急性经皮毒性试验GB/T 15670.5-2017第三方检测机构

背景：农药在农业生产中发挥着重要作用，但其毒性可能对人类和环境造成危害。急性经皮毒性试验是评估农药通过皮肤接触后对机体产生的健康损害效应的重要手段。

目的：该标准旨在规范急性经皮毒性试验的方法与要求，确保试验数据的准确性、可靠性和可比性，为农药登记提供科学依据，保障农产品质量安全与生态环境可持续发展。

该标准适用于为农药登记而进行的急性经皮毒性试验。

物种选择：标准推荐使用健康的大鼠或豚鼠作为试验动物。大鼠常用品系为SD大鼠或Wistar大鼠，豚鼠常用品系为Hartley豚鼠。这些动物品种的皮肤结构与人类有一定相似性，且具有繁殖能力强、生长周期稳定、对毒物反应敏感且一致等特点，能较好反映农药经皮毒性情况。

年龄与体重：大鼠年龄通常为6-8周龄，体重方面，雄性大鼠体重200-250g，雌性大鼠体重180-220g；豚鼠年龄一般为3-4月龄，体重350-500g。需选择无特定病原体（SPF）级动物，确保动物无潜在疾病感染，避免疾病影响试验结果。

性别与数量：动物性别需兼顾，通常雌雄各半。若农药有性别特异性毒性，需单独分析不同性别动物的试验数据。每组至少使用10只同性成年动物（雌雄各半），以确保数据的统计学意义。

皮肤预处理：试验前需对动物进行编号，采用耳标或染色等方式便于个体识别。然后去除动物背部毛发，脱毛范围一般为体表面积的10%-15%，脱毛时避免损伤皮肤。脱毛后观察24小时，确认皮肤无红肿、破损等异常方可进行后续试验。

染毒操作：

染毒剂量设置：需根据预试验结果或相关文献资料，设计合理的染毒剂量梯度，通常设置4-5个剂量组及空白对照组和溶剂对照组。剂量范围应涵盖能引起动物死亡、出现中毒症状及无明显反应的剂量，以准确计算LD50。

染毒方法：将配制好的样品均匀涂抹在动物脱毛区皮肤上，涂抹面积一般为1-2cm²/100g体重，然后用透气敷料覆盖，防止样品脱落和动物舔舐。染毒时间通常为24小时，期间需观察动物状态。

染毒后处理：染毒结束后，用适宜溶剂清洗皮肤，去除残留样品，清洗时动作轻柔，避免损伤皮肤。

观察与记录：

观察指标：染毒后需定期观察动物的外观、行为活动、饮食饮水情况及有无中毒症状。中毒症状包括皮肤红肿、瘙痒、脱毛，以及精神萎靡、共济失调、呕吐、腹泻、呼吸困难等全身症状。

体重变化：记录动物染毒前、染毒后及处死前的体重，体重连续3天下降或总下降超10%，需重点记录。

皮肤局部反应：按标准将皮肤反应分为无反应、轻度红肿、中度红肿、重度红肿伴糜烂4级，每日观察并记录。

致死情况与病理检查：记录动物死亡时间、死前症状，对死亡动物及试验结束时的存活动物进行病理检查，重点观察皮肤、肝脏、肾脏等器官。

LD50计算：标准推荐采用概率单位法或寇氏法计算LD50。概率单位法适用于剂量反应关系呈正态分布的情况，寇氏法适用于剂量组间距相等且死亡率呈规律性变化的场景。计算时需准确录入各组剂量与死亡数，确保数据无误。

毒性分级：根据LD50值将农药急性经皮毒性分为4级：

剧毒：LD50≤50mg/kg

高毒：50mg/kg<LD50≤200mg/kg

中等毒：200mg/kg<LD50≤2000mg/kg

低毒：LD50>2000mg/kg

质量控制：

样品制备：样品需为农药原药或制剂的代表性样品，制备时要保证均匀性。若为固体样品需研磨至适宜粒度，液体样品需充分搅拌。制备过程中避免样品污染，所用器具需洁净、干燥，且制备量要满足整个试验需求。

动物福利：试验过程中需遵循动物伦理要求，尽量减少动物痛苦。如染毒期间动物出现剧烈挣扎，可适当固定动物，但需保证动物呼吸通畅，避免过度束缚导致应激反应。

环境控制：试验环境需保持稳定，温度、湿度、光照等条件需符合动物生长要求，避免环境因素干扰试验结果。

试验报告：报告需包含动物品种、剂量设置、LD50值及置信区间、毒性分级、观察到的毒性反应等信息。需注明试验是否符合GLP规范，数据是否可追溯，确保报告能被农药登记审批部门认可。