蛋白质/多肽《中国药典》2015年版四部通则0541电泳法第三方检测机构，蛋白质/多肽标准检测

在《中国药典》2015年版四部通则0541中，电泳法被明确为一种用于分离、分析和鉴定蛋白质/多肽等生物大分子的技术，其标准检测方法涵盖多种电泳技术，以下是对蛋白质/多肽电泳法标准检测的详细归纳：

一、电泳法分类

电泳法一般可分为两大类：

1. 自由溶液电泳或移动界面电泳：不含支持物的电泳，溶质在自由溶液中泳动，适用于高分子的检测。

2. 区带电泳：含有支持介质的电泳，带电荷的供试品（如蛋白质、核苷酸等大分子或其他粒子）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，在电场的作用下，向其极性相反的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带。

二、区带电泳法具体技术

区带电泳法可选用不同的支持介质，以下是一些常用的技术：

1. 纸电泳法：

2. 仪器装置：包括电泳室及直流电源，常用的水平式电泳室装置包括两个电泳槽和一个可以密封的玻璃板盖，两侧的电泳槽均用有机玻璃板分成两部分，外格装有铂电极，里格为可放滤纸的有机玻璃电泳槽架。

3. 试剂：电泳缓冲液（如枸橼酸盐缓冲液）需按《中国药典》规定配制。

4. 操作方法：包括纸的处理、点样、电泳、含量测定等步骤。

5. 醋酸纤维素薄膜电泳法：

6. 仪器装置：与纸电泳法相同。

7. 试剂：包括巴比妥缓冲液、染色液、脱色液等，需按《中国药典》规定配制。

8. 操作方法：包括醋酸纤维素薄膜的预处理、点样与电泳、染色、透明、含量测定等步骤。

9. 琼脂糖凝胶电泳法：

10. 仪器装置：与纸电泳法相同。

11. 试剂：包括醋酸-锂盐缓冲液、胺蓝溶液等，需按《中国药典》规定配制。

12. 操作方法：包括制胶、点样与电泳、染色与脱色等步骤。琼脂糖凝胶电泳法具有分子筛作用，适用于核酸、核蛋白等的分离、鉴定与纯化。

13. 聚丙烯酰胺凝胶电泳法：

14. 仪器装置：通常由稳流电泳仪和圆盘电泳槽或平板电泳槽组成。

15. 试剂：包括丙烯酰胺单体、交联剂甲叉双丙烯酰胺、催化剂等，需按《中国药典》规定配制。

16. 操作方法：包括制胶、点样与电泳、染色与脱色等步骤。聚丙烯酰胺凝胶电泳法可根据仪器装置的不同分为水平平板电泳、垂直平板电泳和盘状电泳，适用于研究生物大分子的特性，如电荷、分子量、等电点等。

17. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法：

18. 原理：根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基钠（SDS）按重量比结合成复合物，使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的净电荷，消除了不同蛋白质分子的电荷效应，使蛋白质按分子大小分离。

19. 仪器装置：恒压或恒流电源、垂直板电泳槽和制胶模具。

20. 试剂：包括分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液、电极缓冲液等，需按《中国药典》规定配制。

21. 操作方法：包括凝胶制备、供试品溶液制备、电泳、染色与脱色等步骤。本法适用于蛋白质的定性鉴别、纯度和杂质控制以及定量测定。

三、系统适用性试验与结果判断