食品新项目NY/T 4630—2025婴幼儿食品和乳品中α-乳清蛋白和β-乳球蛋白含量的检测第三方检测机构

标准号：NY/T 4630—2025

发布日期：2025年1月9日

实施日期：2025年5月1日

归口单位：全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC 274）

起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业农村部奶产品质量安全风险评估实验室（北京）等7家机构

第一法（反相液相色谱法）：适用于生牛乳和巴氏杀菌牛乳中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定。定量限为：α-乳白蛋白25mg/kg，β-乳球蛋白100mg/kg。

第二法（凝胶渗透色谱法）：适用于高温杀菌牛乳、灭菌牛乳、牛乳粉和牛乳基婴幼儿配方乳粉中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定。定量限为：生乳/巴氏乳中α-乳白蛋白25mg/kg、β-乳球蛋白100mg/kg；高温杀菌乳/灭菌乳中α-乳白蛋白50mg/kg、β-乳球蛋白100mg/kg；乳粉/婴幼儿配方乳粉中α-乳白蛋白250mg/kg、β-乳球蛋白500mg/kg。

第一法：样品用水溶解后调节pH至4.60，沉淀酪蛋白和变性乳清蛋白。离心后取上清液稀释并过膜待测。采用C₄色谱柱（250mm×4.6mm，3.5μm）和紫外检测器（210nm），以0.1%三氟乙酸水溶液和0.1%三氟乙酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱。

第二法：样品用水溶解后调节pH至4.60，沉淀酪蛋白。离心后取上清液，加入胍缓冲液（pH7.5）和β-巯基乙醇，室温静置2小时以还原二硫键生成单体蛋白。采用二醇基亲水硅胶柱（300mm×4.6mm，2μm）和紫外检测器（280nm），以胍缓冲液为流动相进行等度洗脱。

样品前处理：包括称样、溶解、调节pH、沉淀蛋白、离心、稀释和过滤等步骤。需注意调节pH的准确性、离心速度和时间以及过滤膜的选择。

仪器配置与色谱条件：包括高效液相色谱仪、色谱柱、流动相、流速、柱温、检测波长和进样量等参数的设置。需根据具体方法选择合适的仪器和条件。

定性定量分析：根据保留时间和特征吸收进行定性分析，采用外标法进行定量分析。需绘制标准曲线并计算样品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的含量。

科学性与实操性结合：标准内容覆盖原理、试剂、仪器、步骤、计算及质控全流程，为乳品质量评估提供了技术依据。

两套检测方案：针对不同乳制品特性制定了两套HPLC检测方案，第一法操作简捷，适用于未变性蛋白的液态乳；第二法通过化学还原处理，解决高温/粉状样品中蛋白变性导致的检测难点。

高灵敏度与准确性：采用高效液相色谱法进行检测，具有灵敏度高、准确性好的优点。