NY/T 1799-2009《菜籽饼粕及其饲料中噁唑烷硫酮的测定 紫外分光光度法》 是中国农业行业标准,用于规范菜籽饼粕及其饲料中噁唑烷硫酮(Oxazolidine Thione,OT)的检测方法。以下是该标准的核心内容及技术要点解析:
噁唑烷硫酮的危害
噁唑烷硫酮是菜籽饼粕中的抗营养因子,属于硫代葡萄糖苷降解产物。其摄入过量会导致动物甲状腺肿大、生长抑制,甚至死亡,严重影响饲料安全性和动物健康。
标准制定的目的
通过紫外分光光度法快速、准确测定菜籽饼粕及饲料中OT含量,为饲料质量控制、贸易仲裁和安全评估提供技术依据。
酶解反应
饲料中的硫葡萄糖苷在芥子酶(EC 3.2.3.1)作用下水解,生成噁唑烷硫酮。
显色反应
OT在碱性条件下与对氨基苯磺酸重氮化,生成偶氮化合物,该产物在特定波长(通常为350-360 nm)下有强吸收峰。
紫外检测
通过比色法测定吸光度,对照标准曲线计算OT含量。
样品采集与制备
采集代表性样品至少500g,四分法缩分至50g。
粉碎样品至80%通过0.28mm筛孔,混匀备用。
样品提取
菜籽饼粕称取1.1g,配合饲料称取5.5g,于103±2℃烘箱中干燥8小时,冷却后jingque称重。
将干燥样品转移至250ml三角烧瓶中,加入70ml沸pH7.0缓冲液,冷却至30℃后,加入0.5g白芥子酶源(由白芥籽经脱脂处理制备)和几滴去泡剂,室温振荡2小时。
净化与萃取
立即将内容物转移至100ml容量瓶中,用水洗涤烧瓶并稀释至刻度,过滤后备用。
取滤液(菜籽饼粕1ml,配合饲料2ml)于分液漏斗中,用二氯甲烷萃取两次,合并层于25ml容量瓶中,定容后摇匀。
紫外检测
在200-280nm波长范围内测定吸光度,用Zui大吸光度值减去280nm处的吸光度值,得到试样测定吸光度值(Ae)。
试样空白:按上述步骤操作,但不加酶源(菜籽饼粕此项免去,Ae为零)。
酶源空白:不加试样,仅加酶源,测得值为酶源空白吸光度值(Ac)。
结果计算
计算公式:
X=m×1000(Ae−Ab−Ac)×Cp×V
1其中: 2 - $X$为每克绝干样中噁唑烷硫酮的毫克数; 3 - $C_p$为转换因素(吸光度为1时,每升溶液中噁唑烷硫酮的毫克数,值为8.2); 4 - $m$为试样绝干质量(g); 5 - $V$为试样测定液体积(ml)。精密度
重复测定6次,相对标准偏差(RSD)≤5%。
回收率:加标回收率应在80%-110%之间。
检出限:通常为0.5 mg/kg(以信噪比3:1计)。
限量要求
产蛋禽配合饲料中噁唑烷硫酮限量≤500毫克/千克;
其他家禽配合饲料≤1000毫克/千克。
根据GB 13078-2017《饲料卫生标准》:
样品均匀性
样品需充分粉碎并混合均匀,避免因颗粒大小差异导致结果偏差。
酶解条件控制
酶解温度需jingque控制在30℃,时间2小时,确保硫代葡萄糖苷充分水解为噁唑烷硫酮。
酶源活性
白芥子酶源需在4℃下保存,且保存期不超过6周。
萃取效率
二氯甲烷萃取需充分,每次萃取后需合并层并定容至刻度,避免目标物损失。
背景干扰消除
在200-280nm波长范围内测定吸光度,用Zui大吸光度值减去280nm处的吸光度值,消除背景干扰。
仪器校准
紫外分光光度计需定期校准,确保波长准确性。
NYT1799 , 噁唑烷硫酮的测定
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