海鲜贝类中腹泻性毒素检测 GB 5009.212-2020方法

GB 5009.212-2016（现行有效版本）规定了海鲜贝类中腹泻性贝类毒素的检测方法，包括小鼠生物法、酶联免疫吸附法和液相色谱-串联质谱法，具体说明如下：

一、标准背景与适用范围

标准号：GB 5009.212-2016。

实施状态：现行有效。

发布与实施日期：2016年12月23日发布，2017年6月23日实施。

适用范围：本标准规定了贝类中腹泻性贝类毒素测定的小鼠生物法、酶联免疫吸附法和液相色谱-串联质谱法。其中，小鼠生物法和酶联免疫吸附法适用于贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的测定；液相色谱-串联质谱法适用于贝类可食部分及其制品（不包括盐渍制品）中腹泻性贝类毒素大田软海绵酸（OA）、鳍藻毒素-1（DTX-1）和鳍藻毒素-2（DTX-2）的测定。

二、检测方法

小鼠生物法

原理：用丙酮提取贝类中腹泻性贝类毒素（DSP），经无水分配，减压蒸干后，再以含1%吐温-60的生理盐水为分散介质，制成DSP混悬液。将该混悬液注射入小鼠腹腔，观察小鼠存活情况，计算其毒力。

试剂与材料：包括丙酮、无水、吐温-60、氯化钠等试剂，以及健康ICR品系雄性小鼠（体重为16g~20g）。

仪器与设备：包括旋转蒸发器、均质器、天平、金属筛网等。

分析步骤：包括样品采集、试样制备、试样提取、小鼠试验等步骤。

分析结果表述：根据小鼠死亡情况计算样品中DSP毒力，并报告结果。

酶联免疫吸附法

原理：基于抗原-抗体反应来检测毒素，具有灵敏度高、操作简便的特点。

检测流程：游离的腹泻性贝类毒素与其酶标记物竞争腹泻性贝类毒素抗体。没有被结合的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶底物和显色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝转变为黄色。用酶标仪在450nm波长下测量微孔溶液的吸光度值，试样中的腹泻性贝类毒素含量与吸光度值成反比，按绘制的标准曲线定量计算。

液相色谱-串联质谱法

原理：液相色谱法可有效分离并检测腹泻性贝类毒素，质谱法则能提供高灵敏度的定性定量分析。

检测流程：样品经提取、净化后，通过液相色谱分离，再经质谱检测器检测，根据保留时间和质谱特征离子进行定性定量分析。

三、判定标准与限量值

判定标准：根据检测方法的不同，判定标准也有所差异。例如，小鼠生物法通常根据小鼠的死亡情况来判断毒素的毒力；而液相色谱-串联质谱法则根据检测到的毒素含量与限量值的比较来判断是否合格。

限量值：根据《食品安全国家标准 鲜、冻动物性水产品》（GB 2733-2015）规定，贝类中腹泻性贝类毒素不得超过0.05MU/g。同时，不同国家和地区可能对腹泻性贝类毒素的限量值有不同的规定。