复合预混料中烟酸、叶酸的测定通常采用高效液相色谱法（HPLC），该方法在多个标准中有提及，如GB/T17813-1999和GB/T 17813-2018。以下是关于复合预混料中烟酸、叶酸测定的详细步骤和相关信息：
本方法适用于复合预混料和维生素预混料中烟酸、叶酸的测定。
测量范围为每千克样品中含烟酸的量在1000mg以上，含叶酸的量在500mg以上。
试样中的烟酸、叶酸用水-甲醇-乙酸混合溶液提取。
将滤液注入高效液相色谱反相柱上进行分离。
用紫外检测器在特定波长（如280nm）处定量测定。
甲醇：优级纯。
三、冰乙酸。
己烷磺酸钠（PICB6）：c〔CH3(CH2)5SO3Na〕=0.005mol/L（或ρ〔CH3(CH2)5SO3Na〕=941mg/L）。
标准溶液配制：包括烟酸标准贮备液、叶酸标准贮备液和烟酸、叶酸标准工作液。
提取液：由去离子水、冰乙酸、三和甲醇混合而成，pH为3.2。
磷酸缓冲液：包含磷酸氢二钾和磷酸二氢钾，用乙腈和去离子水定容，pH调节至6.5。
高效液相色谱仪。
色谱柱：如C18色谱柱（250mm×4.6mm, 5μm）。
超声波水浴。
移液器、量筒、瓶塞等实验器具。
样品制备：取预混合饲料样品，按照一定方法处理（如振荡、离心、过滤等）得到待测溶液。
色谱条件：设置流动相、检测波长、进样量、柱温等参数。例如，流动相可以是磷酸二氢钾缓冲液和甲醇-乙腈的混合液，检测波长可以为254nm。
进样分析：将待测溶液注入高效液相色谱仪进行分析，记录色谱图和峰面积。
结果计算：根据标准曲线和峰面积计算饲料中烟酸、叶酸的含量。
在采样、提取和测定过程中，应确保样品的均匀性、完整性和避免污染。
提取剂的选择和提取条件的控制是影响测定结果的关键因素。
注意仪器精度和操作规范，确保测定结果的准确性和可靠性。
高效液相色谱法测定复合预混料中烟酸、叶酸的方法简便、快速、准确度和精密度高。
根据GB/T17813-2018标准，本方法对烟酸和叶酸的检出限和定量限较低，分别为0.015mg/kg和0.013mg/kg（烟酸）以及0.050mg/kg和0.043mg/kg（叶酸）。
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