酶联免疫ELISA检测，酶联免疫吸附试验机构

酶联免疫检测(elisa)是常见的抗体或抗原测定方法。elisa是基于相关联的酶对那些免疫复合物发生酶催化反应进行测定的。抗体可以固定在一个有表面涂层的塑料板上，因此经简单洗涤这块塑料板，免疫复合物就易于与其他组分分开，而进行测定。

酶联免疫检测法(pstvd除外)全过程包括病毒抗原的分离与纯化、病毒抗血清的制备和抗血清反应3个环节。抗血清反应实验步骤包括：抗原吸附在固相载体上，加待测抗体，再加相应酶标记抗体，生成抗原一待测抗体一酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体的量。待测抗体的量与有色产物成正比。同理也可包被抗体，测定抗原含量。elisa常用的有直接法测定抗原、竞争法测定抗原、双抗体夹心法测定抗原等方法。

1. 直接elisa

直接elisa是将已知抗体固定在微孔板上，并加入待检样本中含有目标抗原的溶液，经过一定条件下的反应后，再加入与目标抗原结合的酶标记二抗，在适当条件下进行染色反应并测定吸光度值。其优点是操作简单快捷，但缺点是灵敏度略低。 

2. 间接elisa

间接elisa是将已知抗体固定在微孔板上，并加入待检样本中含有目标抗原的溶液，在适当条件下进行反应后加入与目标抗原结合的一抗，再加入与一抗结合的酶标记二抗，在适当条件下进行染色反应并测定吸光度值。其优点是灵敏度高，但操作稍复杂。

关于酶联免疫，北京清析技术研究院可提供固相酶联免疫测定，elisa测定，酶联免疫雌激素含量测定，水产品酶联免疫测定，真菌毒素酶联免疫测定，细胞壁物质酶联免疫测定，酶联免疫测定结果分析，酶联免疫实验报告测定，黄曲霉毒素b1酶联免疫测定，均相酶联免疫测定，植物激素酶联免疫测定，酶联吸附免疫测定，三聚氰胺酶联免疫测定，辣椒素酶联免疫测定，酶联免疫吸附测定，elisa实验，酶联免疫荧光测定等检测项目。

酶联免疫吸附试验效果测定

测定内容包括酶和抗体活性、结合物中酶含量和igg含量、酶与igg摩尔比值以及结合率。

⑴酶与抗体的活性　常用琼脂扩散或免疫电泳法，使抗原与抗体形成沉淀线，经pbs漂洗1天，再以蒸馏水浸泡1小时，将琼脂凝胶片浸于酶底物溶液中着色，如果出现应有的颜色反应，再用生理盐水浸泡，颜色仍然不褪，表示结合物既有酶的活性，也有抗体活性。良好的结合物在显色后，琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定方法是用系列稀释的酶标抗体直接以elisa方法进行方阵滴定，此法不仅可以测定标记效果，还可以确定酶标抗体的使用浓度。

⑵结合物的定量测定　一般是对结合物中的酶和igg进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定，然后按下列公式计算：

酶量（mg/ml）=od403×0.42

igg量（mg/ml）=（od280－od403×0.4）×0.94×0.62

对于过碘酸钠氧化法制备的标记抗体量，按下列公式计算：

igg量（mg/ml）=（od280－od403×0.34）×0.62

已知酶量和igg量后，即可计算出标记抗体的摩尔（mol）比值。

hrp/igg摩尔比值=hrp（mg/ml）/igg（mg/ml）×4

结合物中酶总量=hrp（mg/ml）×结合物溶液量

结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×10 0%

用于elisa的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般，为500(g/ml时效果较好，达1000(g/ml时效果好。mol.比值由于结合物中含的igg并不完全可靠，所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般，1.0时效果较好，1.5-2.0时好。酶结合率为7%时效果一般，为9%－10%较好，达30%以上时好。

检测标准

1、yy/t 1529-2017 酶联免疫分析仪

2、t/shdsgy 172-2022酶联免疫吸附测定法(elisa)

3、gb/t 33411-2016 酶联免疫分析试剂盒通则

4、gb/t 实验动物 酶联免疫吸附试验

5、ny/t 1750-2009 甜菜丛根病的检验.酶联免疫法

6、yy/t 1183-2010 酶联免疫吸附法检测试剂（盒)

7、gh/t 1315-2020 蜂蜜中酪蛋白的测定 酶联免疫法

8、db34/t 2562-2015 大曲酯酶活力的检测酶联免疫法（elisa）

9、jjf 2035-2023 斑点酶联免疫分析仪校准规范

10、yy/t 1237-2014弓形虫igg抗体检测试剂(盒)(酶联免疫法)

11、t/jaass 5-2020 蔬菜中甲基对硫磷残留的测定酶联免疫法

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