噬菌体检测，噬菌体检测机构

噬菌体（bacteriophage, phage）是感染细菌、真菌、藻类、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。二十世纪初在葡萄球菌和志贺菌中首先发现[3]。作为病毒的一种，噬菌体具有病毒的一些特性：个体微小；不具有完整细胞结构；只含有单一核酸。可视为一种“捕食”细菌的生物。噬菌体基因组含有许多个基因，但所有已知的噬菌体都是细菌细胞中利用细菌的核糖体、蛋白质合成时所需的各种因子、各种氨基酸和能量产生系统来实现其自身的生长和增殖。一旦离开了宿主细胞，噬菌体既不能生长，也不能复制。

噬菌体是病毒的一种，其特别之处是专以细菌为宿主，较为人知的噬菌体是以大肠杆菌为寄主的t2噬菌体。跟别的病毒一样，噬菌体只是一团由蛋白质外壳包裹的遗传物质，大部分噬菌体还长有“尾巴”，用来将遗传物质注入宿主体内。噬菌体是一种普遍存在的生物体，而且经常都伴随着细菌。通常在一些充满细菌群落的地方，如：泥土、动物的内脏里，都可以找到噬菌体的踪影。世上蕴含丰富噬菌体的地方就是海水。

噬菌体的种类

1、毒性噬菌体

指在宿主菌体内复制增殖，产生许多子代噬菌体，并终裂解细菌。毒性噬菌体的增殖方式是复制，其增殖过程经历吸附穿入、生物合成和成熟释放3个阶段。

进入菌细胞内的噬菌体核酸首先经早期转录产生早期蛋白质，并复制子代核酸，再进行晚期转录产生噬菌体的结构蛋白。子代噬菌体达到一定数量时，由于噬菌体合成酶类的溶解，菌细胞突然裂解，释放出的噬菌体再感染其他敏感细菌。

2、温和噬菌体

感染宿主菌后并不增殖。其基因整合于细菌染色体上，即前噬菌体，随细菌染色体的复制而复制，并随细菌分裂而分配至子代细菌的染色体中。温和噬菌体有溶原性周期和溶菌性周期，可偶尔自发地或在某些理化或生物因素地影响下，整合的前噬菌体脱离宿主菌染色体，进入溶菌性周期导致细菌裂解，并产生新的成熟噬菌体。

噬菌体的应用

1、作为分子生物学研究的试验工具

噬菌体是遗传调控、复制、转录与翻译等方面的生物学基础研究和基因工程中的重要材料或工具。遗传学中的转导作用就是以噬菌体作为媒介，在2株细菌间传递遗传物质。

2、用于细菌的鉴定和分型

噬菌体只能侵染相应的细菌，具有高度的特异性，可用于细菌鉴定。同时，噬菌体具有型的特异性，可对细菌进行分型鉴定。可以利用噬菌体对沙门氏菌、大肠杆菌和伤寒菌等进行分型。

3、用于检测和控制致病菌

食品和环境中存在许多致病菌，研究表明噬菌体能够检测和控制食品和环境中致病菌及腐败菌的生长。bmvkolyu等讨论了噬菌体检测致病菌的优缺点，指出利用噬菌体检测食品安全及加工制造过程等方面存在的致病菌具有极大的应用前景。姜琴等指出利用噬菌体可以实时、快速而准确地检测食品中的沙门氏菌，在公共和食品卫生、畜牧兽医和121岸检疫中具有重要的意义。刘心妍认为噬菌体不仅可用于检测食源性致病菌，还可以应用在原料采集环节杀灭病原菌、生产或加工环节对设备等进行消毒、延长食品储藏期、消毒新鲜水果蔬菜等方面。

噬菌体检测方法

噬菌体检样可以是发酵液、空气、污水、土壤等(至于无法采样而需检查的对象，可以用无菌水浸湿的棉花涂拭表面作为检查样品)。为了易于分离可先经增殖培养，使样品中的噬菌体数量增加。

采用微生物测定法进行噬菌体检测，约需12h左右，因而不能及时判断是否有噬菌体污染。通过快速检测可大致确定是否有噬菌体污染，以采取必要的防治措施。根据正常发酵(培养)液离心后菌体沉淀，上清液蛋白含量很少，加热后仍然清亮;而侵染有噬菌体的发酵(培养)液经离心后其上清液中因含有自裂解菌中逸出的活性蛋白，加热后发生蛋白质变性，因而在光线照射下出现丁达尔效应而不清亮。此法简单、快速，对发酵液污染噬菌体的判断亦较准确。但不适于溶源性细菌及温合噬菌体的诊断，对侵染噬菌体较少的一级种子培养液也往往不适用。

噬菌体的效价即1ml样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。效价的测定一般采用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一般一个噬菌体产生一个噬菌斑，故可根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数，计算出噬菌体的效价。此法所形成的噬菌斑的形态、大小较一致，且清晰度高，故计数比较准确，因而被广泛应用。

噬菌体核酸和蛋白质检测方法

1、聚合酶链式反应（pcr）

聚合酶链式反应（pcr）是一种简单而可靠的方法，它以核酸检测为基础，能比噬菌斑测定更快地验证噬菌体的存在。通过应用随机扩增多态性dna(rapd)pcr还可以在几小时内区分出不同的噬菌体谱系，而不需要进行全基因组测序。然而，由于噬菌体中没有普遍存在的标志性基因（如细菌中的16srrna基因），因此设计针对整个噬菌体多样性的引物很麻烦。pcr的另一个缺点是结果不可量化，因为该反应具有终点特征。随着该领域的进步，开发了定量pcr（qpcr）。类似地，蛋白质检测领域也迅速发展，液相色谱-串联质谱法（lc-ms-ms）可用于精准检测和计数未知样品中的多肽。

2、定量聚合酶链式反应（qpcr）

嵌入荧光染料的发现使人们能够测量每个pcr循环后聚合的dna产物的量，即定量聚合酶链式反应（qpcr）方法。荧光由热循环仪记录，能够一步扩增核酸并检测荧光。计算初始dna浓度时，可以将标准用作参考。整个qpcr平台中使用了两种基本化学成分：第一种是嵌入荧光dna染料，第二种是通过探针、附加的带有荧光染料和猝灭剂分子的短dna片段进行操作。对于双链dna的定量，嵌入染料的使用选择性比较低，使用荧光标记的探针更精准，因为只有在所有三个dna片段（正向引物，反向引物和探针）成功杂交并随后聚合后才能产生信号，这两种方法已广泛用于噬菌体生物学。

噬菌体检测标准举例

1、t/sdaa 015-2021 畜禽用噬菌体制剂

2、t/sdaa 017-2021 噬菌体筛选技术规程

3、ks i iso 10705-4-2019水质检测和噬菌体计数第4部分:感染噬菌体的计数

4、ks i iso 10705-2-2016水质.细菌噬菌体的检测和计数.第2部分:体噬菌体的计数

5、ks i iso 10705-2:2016 水质 噬菌体的检查和计数第2部分：体大肠噬菌体的计数

6、ks i iso 10705-2-2021水质.噬菌体的检测和计数.第2部分:体细胞大肠杆菌噬菌体的计数

7、ks i iso 10705-1-2019 水质 - 噬菌体的检测和计数- 第1部分:f特异性rna噬菌体的计数

噬菌体检测时间周期

到样后7-10个工作日（可加急），根据样品及其检测项目/方法会有所变动，具体需咨询工程师。

噬菌体检测流程

1、沟通需求（在线或电话咨询）；

2、寄样（邮寄样品支持上门取样)；

3、报价（根据检测的复杂程度进行报价）；

4、签约（签订合同和保密协议）；

5、完成检测（检测周期会根据样品及其检测项目/方法会有所变动，出具检测报告，售后服务）。

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