无锡市口罩细胞毒性检测
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- 江苏省广分检测技术有限公司
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- 技术总监
- 汤经理
- 所在地
- 江苏省昆山市陆家镇星圃路12号智汇新城B区7栋
- 更新时间
- 2024-06-14 08:00
细胞毒性是由合成化合物、细胞自然产生毒性或免疫调节细胞(如细胞毒性t淋巴细胞,自然杀伤细胞等)引起的细胞杀伤事件。目前主要通过对受损细胞释放的相关底物(如乳酸脱氢酶-ldh)进行定量,从而判断细.胞膜的受损情况。本期,将为大家讲解有关细胞毒性的检测产品、原理及特点等内容
细胞毒性检测(乳酸脱氢酶)是稳定的胞浆酶,存在所有的细胞中,当胞膜损伤时快速释放到细胞培养液中。ldh活性通过两个酶催化反应:ldh氧化乳酸盐生成丙酮酸盐,然后丙酮酸盐和四唑盐int反应生成甲(formazan)结晶。甲(formazan)结晶量在培养液中的增加,与裂解的细胞数增加直接相关。甲(formazan)结晶染料是水溶的,可以用分光光度计在500nm波长检测。通过检测细胞培养上清中ldh的活性,可判断细胞受损的程度此分析灵敏、方便、**,适用于许多种细胞毒性分析。此分析大概需0.5-1h。
检测方法:试剂:该检测方法一般有配套的试剂盒,以400t的试剂盒为例,包括以下试剂:components,400assays,catalyst(lyophilized),dye solution,1 vial,45 ml
工作液的制备:
a. 用ddh2o溶解催化剂(catalyst)10min,充分混匀。催化剂溶液4℃可保存数周。
b. 染色液(catalyst)4℃可保存数周。
c. 反应混合液的制备:分析100 assays,混合250ul催化液和11.25ml染色液。混合液现配现用。
细胞毒分析步骤
(1)收集细胞,用1×分析液(如,1%血清或1%bsa培养液)。
(2)在96孔板中分别制备下列样本:
背景对照:每孔加200ul培养液,3个复孔。背景值应从其他值中减去。
低对照:向每孔200ul分析液中加1-2×104细胞,3个复孔。
高对照:向每孔200ul含1%triton x-100的分析液中加1-2×104细胞,3个复孔。
检测样本:向每孔200ul含检测物质的分析液中加1-2×104细胞,3个复孔。
(3)在培养箱中(5%co2,90%湿度,37℃)孵育细胞,孵育时间为检测物质的适当处理时间。
(4)离心细胞250g,10min。
(5)每孔小心转移100ul上清到相应的优化清洁96孔板中。
(6)每孔加入100ul反应混合液,室温孵育30min。避光操作。
(7)用微孔读板仪在490-500nm检测所有样本的吸光值。参考波长大于600nm。
5. 计算细胞毒的百分比:
细胞毒(%)=(检测样本-低对照)/(高对照-低对照)%
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