GUS染色液(即用型)

gus染色液（即用型）

货号：rs4200

有效期：6个月

产品内容：

产品说明：

gus（β-galactosidase）基因是存在于e.coli等一些细菌基因组内的编码β-葡萄糖苷酸酶的一种水解酶，该基因常作为融合标记用于植物转基因分析和调控研究中。gus受体基因系统有表达e.coligus酶的稳定性和在植物内的低活性，绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。5-bromo-chloro-3-indolylβ-d-glucuronide，cyclohexylammoniumsalt(简称为x-gluc或x-glca)分子量为521.8，cas号为18656-96-7，是检测大肠杆菌中gus基因的底物，可快速检测植物中gus基因融合标记。

gus染色液(即用型)又称β-葡萄糖苷酶基因染色试剂盒(β-galactosidase reporter genestaining kit)简称为gus染色液，其染色原理是适宜的反应条件下β-葡萄糖苷酶(gus)可将x-gluc水解成蓝色物质，该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质，具有gus活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到，gus染色液可用于生物化学活性分析、免疫分析以及组织和细胞的组织化学染色，多用于转基因植物的gus基因表达分析，该即用型试剂比常规gus染色液操作简便。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、 70%乙醇

2、 去离子水

3、 小瓶或多孔板、显微镜

操作步骤(仅供参考)：

1、 配制x-gluc溶液(50x)：

20ml体积：取400ul x-glucsolution完全融化后加至1支x-gluc中，充分溶解，即获得x-gluc溶液(50x)。配制好的x-gluc溶液(50x) -20℃保存，1个月有效。

50ml/100ml体积：取1ml x-gluc solution完全融化后加至1支x-gluc中，充分溶解，即获得x-gluc溶液(50x)。配制好的x-gluc溶液(50x) -20℃保存，1个月有效。

500ml体积：取2ml x-glucsolution完全融化后加至1支x-gluc中，充分溶解，即获得x-gluc溶液(50x)。配制好的x-gluc溶液(50x) -20℃保存，1个月有效。

2、 配制x-gluc 染色液：取适量x-glucsolution(50×)和gus buffer，按1:49比例充分混匀，配制成x- gluc 染色液，如取200ul x-glucsolution(50×)加入到9.8ml gus buffer中，即配成10ml gus染色液，该染色液**现配现用，短期可4℃保存3d。

3、 取适量待染液片等组织加入适量gus染色液，使gus染色液完全浸没组织。

4、 37℃孵育1-24h。随着孵育时间的延长，蓝色渐渐出现，当表达量较高时，gus活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。

5、 用70%乙醇脱去样本的叶绿素，一般样本浸没于乙醇1-3h，至阴性对照呈白色。如有必要可重复该脱色步骤，以便彻底清除叶绿素。样本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光学显微镜下观察，白色背景上的蓝色即为gus表达位点。

注意事项：

1、 gus染色液一般冰上配制，可以4℃避光保存3天。

2、 x-glucsolution(50×)应避免反复冻融，否则染色效率会下降。

3、 由于组织特异性等原因，蓝色颜色反应可能不完全一致，应注意摸索具体实验条件。

4、 拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1-3mm）。

5、 当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物渗入细胞，建议使用gus染色液（rs2400）。

6、 gus染色液(即用型)染色灵敏度较好，但有时会出现非特异性反应(即假阳性)，如非特异性反应较明显，建议采购常规gus染色液（rs2400）。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。