水稻原位杂交检测服务 科锐诺
- 供应商
- 武汉科锐诺生物科技有限公司
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- 联系电话
- 18627856353
- 手机号
- 18627856353
- 联系人
- 王总
- 所在地
- 湖北省武汉市江夏区神墩四路666号武汉国英种子A栋1楼
- 更新时间
- 2022-12-22 11:02
1,组化
实验原理:组化(ihc),是应用抗原与特异性结合的原理,通过酶标与底物反应显色,从而对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究,称为组织化学技术。组化(ihc)具有特异性强、敏感度高、定位准确的优点。
1, 荧光
实验原理:荧光(if),是应用抗原与特异性结合的原理,通过荧光标记对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究。目前皮诺飞生物主要可以对石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、组织芯片进行荧光检测。皮诺飞生物目前已突破传统的荧光双标限制,开发出多色荧光技术(多可达7色)。
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的pbst溶液,放置5分钟。
2) 置换成30%的pbst溶液,放置5分钟
3) 置换成pbst溶液,放置5分钟,重复一次
4) 置换成4%多聚甲醛的pbs溶液固定20分钟5) 用pbst洗两次,每次放置五分钟,室温。
蛋白酶处理与后固定(本实验不做此步)
1)用10ul/ml的蛋白酶k在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理,5体节到24小时的胚胎处理3分钟,24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。
2) 用pbst溶液轻洗,在pbst中放置5分钟。
3) 用4%多聚甲醛的pbs溶液固定20分钟,室温。
4) 用pbst洗两次,每次放置五分钟,室温。
2. 预杂交
1)每个管中置换成大约300ulhyb-溶液,60℃水浴5分钟,避免振荡。
2)用等体积的hyb+取代hyb-。
3)60℃水浴,预杂交4小时以上。
3. 杂交
1)吸去预杂交的hyb+,加上100ul已加入探针的hyb+溶液(探针浓度约为1ng/ul)..
2)60℃ 温浴过夜。注:杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等,温度越低,探针结合越好,温度越高,背景越小。
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