一、金银花提取物honegsukle、氯原酸chiorogenicacid、hplc20%、hplc40%、广谱抗菌,抗病毒抗突变,利胆,抗氧化,升高白细胞
二、金银花提取物资料
[药材来源]
本品为忍冬科植物忍冬lonicerajaponicathunb,红腺忍冬,山银花l.confusadc.或毛花柱忍冬l.dasystylarehd的干燥花蕾或带初开的花。忍冬除黑龙江、内蒙古、青海、宁夏、新疆、西藏自然生长外,全国均有分布;红腺忍冬分布于广东、广西、贵州、云南;山银花分布于浙江、江西、福建、湖南、广东、海南、广西;毛柱花忍冬分布于广东肇庆、广西。
[药材质量]
1.忍冬花蕾氯原酸含量比较,山东临沂为5.19%,湖南新化为5.02%,广西金洲为4.95%,桂林为3.69%,四川万县为2.90%,绵阳为2.02%。(1)
2.阳坡产花蕾的含量3.96%,大于阴坡的1.44%。(2)
3.甘肃产叶藏花、盘叶忍冬,花蕾的氯原酸含量较高,天水高为6.30%,成县低为4.87%。(3)
4.叶的含量是花蕾的30-60%,一般8-9月份采收,氯原酸的含量花蕾为5.81%,叶为2.57%,根1.40%,茎0.92%。(4)
5.金银花储存两年,氯原酸含量由1.44%下降到1.34%。(5)
6.不同来源及不同季节忍冬茎叶中有效成分含量比较(6)
6.1不同来源忍冬的叶、茎中有效成分的含量,分别测定异氯原酸、氯原酸及总含量,大毛花叶分别为1.65%、1.37%、3.02%,腺花叶1.51%、0.49%、2%,密二花叶1.82%、0.96%、2.78%,大毛花鲜茎,总含量为1.01%。
6.2不同季节腺花叶中有效成分的含量,分别测定异氯原酸、氯原酸及总含量,82年3月10日,1.40%,0.49%、1.89%,82年5月10日,1.61%、0.7%、2.31%,82、7、10,1.81%、0.85%、2.66%,82年9月10日,1.62%1.37%、2.99%,82年10月30日,1.43%、1.12%、2.55%,82年12月10日,1.30%、1.08%、2.38%。
7.忍冬藤与金银花中氯原酸含量,金银花中氯原酸含量为1.75%,忍冬藤中含量为1.13%。(7)
1.14种金银花样品情况及测定结果(8)
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[产品规格]
金银花提取物氯原酸含量要求为20%或40%(hplc检测)。
[主要成分]
金银花中主要化学成分为氯原酸和异氯原酸,还含有挥发油类化合物、黄酮类和三萜类等。
1.氯原酸(chlorogenicacid):分子式c16h18o9,分子量354.30,半水合物为针状结晶,110℃变为无水化合物,mp208℃。25℃水中溶解度为4%,热水中溶解度更大,易溶于乙醇和丙酮,极微溶于乙酸乙酯。
2.其他成分:异氯原酸(isochlorogenicacid),木犀草素-7-葡糖苷(luteolin-7-glucoside),咖啡酸(caffeicacid),忍冬苷(lonicein),多糖,鞣质等。
[提取工艺]
1.金银花中氯原酸的提取分离
1.1水提取石灰乳沉淀法(9)
金银花,加入10倍量水回流提取2次,提取时间1.5h,(注:不回流,温度不超过80℃为好,避免破坏),合并提取液浓缩至1:2.5(w/v),缓缓加入20%的石灰乳调ph值至10左右,离心,沉淀物,加入2倍量乙醇研磨成浆,搅拌下滴加50%硫酸调ph至3左右,充分搅拌,离心,酸水液浓碱调ph6左右,回收乙醇,减压烘干,得粗提取物。
粗提取物溶于2-3倍量水中,hcl调ph2,以乙酸乙酯提取数次,乙酸乙酯液用活性炭脱色,过滤,滤液浓缩后,分次加入适量的氯仿,滤取固体物,减压干燥,得淡黄色氯原酸
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固体。收率0.5%。
1.2水提异戊醇萃取法
金银花加入14倍量水,80℃浸泡2次,每次2小时,合并浸液,浓缩至比重为1.15-1.20,浓缩液调ph值3以下,酸调液过滤,滤液加异戊醇萃取2次,异层合并10%naoh调ph7.0,水层回收,异层复用,再反复萃取3次,1-2次,收率2.7%,含量50%以上,3至5次,收率0.9-1.1%,含量30%以上。
1.3乙醇提取法
金银花,加入10倍量75%乙醇回流提取0.5h,提取2次,回收乙醇,浓缩液加入适量冷水,过滤除去脂溶性成分,再次醇沉。
2.金银花中氯原酸提取工艺的比较与优化
2.1传统水煎煮法
金银花50g,加10倍量水,回流提取两次,每次1.5h,氯原酸提取量高,1.949g,提取率81.45%。收率30%,
2.2乙醇回流法
金银花50g,加75%乙醇10倍量,回流提取0.5h,氯原酸提取量高,2.193g,提取率91.64%。
2.3动态温浸法:金银花50g,加水14倍量,于80℃搅拌温浸2h,氯原酸提取量高,1.877g,提取率78.44%。
2.4超声波提取法:金银花50g,加12倍量水,在25hz超声波作用下,提取0.5h,氯原酸提取量高,1.504g,提取率62.85%。
2.5乙醇渗漉法:金银花50g,用65%乙醇,61倍量进行渗漉,氯原酸提取量高,1.938g,提取率为80.99%。
3.金银花中多糖的提取(10)
金银花用80%乙醇提取一次,回收提取氯原酸,残渣加水煎煮,水煎液加硫酸铵至饱和,离心,溶液透析,冷冻干燥,得粗多糖,用edta葡聚糖凝胶a-25柱层析分离,在一定浓度的磷酸盐缓冲液中,以不同浓度的nacl为洗脱剂,得有光泽的固体物(约占粗多糖66%),用十六烷基三甲溴化铵(ctab)在酸水液中沉淀多糖的方法处理,中性多糖为白色,酸性多糖为棕色,纯化为白色酸性多糖。
2.金银花中忍冬黄素的提取(11)
金银花叶,水煎煮,水煎液,减压浓缩,通过聚酰胺柱,依次用水、10%、25%、35%乙醇冲洗,再用50%乙醇洗脱,收集洗脱液,50%乙醇洗脱液,浓缩,放置沉淀,过滤,沉淀物乙醇重结晶,得忍冬黄素精品。
[质控要点]
1.据资料报导,水煎煮法没有动态温浸法提取率高,氯原酸在长时间加热时会被破坏,注意提取温度不可过高,
2.氯原酸在碱性条件下水解为鞣酸与咖啡酸,在加碱处理时要特别小心。
3.钙盐沉淀,可能沉淀不完全,另外在酸解离时,会被沉淀物吸附一部分氯原酸,要注意洗涤处理。
4.氯原酸在乙酸乙酯中溶解度很低,要检测是否提取完全。
5.异戊醇萃取时,调ph碱化时,要准确进行,如果水层偏碱,要回调,避免在浓缩回收时分解。
[功效与应用]
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金银花具有清热解毒、凉散风热的功效。用于痈肿疔疮,喉痹,丹毒,热毒血痢,风热感冒,温病发热。
金银花广谱抗菌,抗病毒、抗突变、抗癌、抗氧化,利胆,升高白细胞。
1.抑菌试验:本品在试管内对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、非溶血性链球菌、伤寒杆菌、志贺氏痢疾杆菌、人型结核杆菌、肺炎双球菌均有抑制作用,本品的水浸液比煎剂的抑菌作用强。
2.金银花能与胆固醇结合,从而可减少家兔肠道对胆固醇的吸收。
3.金银花经乙醇提取后的水煎浸膏对小鼠腹腔注射及孕20~22天狗静脉滴注,均有较好的抗早孕作用。孕期三个月的猴羊膜腔给药也有抗早孕作用。
[参考文献]
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(2)李强,等中国中药杂志,1994;19(10):595
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(6)董熙嘏,等中药通报1985;10(5);31
(7)李伯延,中草药1986;17(6):10
(8)丁济,等中草药1981;12(1)11
(9)孙文基,等天然药物成分提取分离与制备,中国原药科技出版社;1994;74
(10)李伯延,等植物药有效成分的提取与分离,山西高校联合出版社,1993;241
(11)林启寿,等中草药成分化学,科学出版社1997;340
三、金银花标准提取工艺流程图
1、金银花提取物生产工艺简图
2.金银花提取物工艺说明
2.1领料根据批生产指令,领出所需干燥金银花原料。
2.2回流提取第一次加金银花原料重量12倍量去离子水,回流提取2小时,滤过(孔径100目),得滤液1;第二次加金银花重量10倍量去离子水,回流提取2小时,滤过(孔径100目),得滤液2,合并两次水提取液。
2.3减压浓缩,真空度控制在0.06mpa,温度为60℃
2.4提取液浓缩按照《外循环真空浓缩回收机使用、维护、保养规程》、《药液浓缩岗位操作规程》操作,开启真空泵及循环水冷却泵,待真空度升至0.04mpa时,向蒸发器中加入提取液至液面高度在下视镜中部,继续抽真空,待真空度至0.05mpa时,打开蒸汽开关,控制真空度在0.05-0.06mpa之间、温度75-85℃之间,保持液位在视镜范围内。
当液体浓缩至比重为1.05-1.10时(60℃),快速滤过(孔径80目),滤液置喷雾干燥贮罐中,以备喷雾干燥用。
2.5喷雾干燥按照《喷雾干燥机组使用、维护、保养规程》、《喷雾干燥岗位操作规程》操作,对上述浓缩液进行喷雾干燥。进风温度控制在170±3℃,出风温度控制在70±3℃。收集金银花提取物装入pe袋中,称重,每桶不超过25kg包装。
浓缩、喷雾干燥应在24小时内完成。
四、工厂设备图
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