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杂交瘤细胞的筛选与克0隆

细胞融合后，培养于添加了 hat 的选择培养基的 96 孔板中，培养一天后半定量换液，培养基更换时应注意轻缓，第 5天能在显微镜下看到明显的杂交瘤细胞克0隆，第 7 天左右，杂交瘤细胞能长至铺满孔底约 1 /10。此时进行 elisa检测养心细胞孔。取细胞培养上清对 mrj 融合蛋白进行间接elisa检测，筛选出能分泌抗0体的杂交瘤细胞孔，有限稀释法对阳性孔进行亚克0隆，经过 3 次亚克0隆后，获得了能够稳定 分 泌 抗mrj 融合蛋白单克0隆抗0体的细胞株。对杂交瘤细胞株按从 96 孔板-24 孔板-10 cm培养皿的顺序扩大培养，部分细胞用于腹0水制备单抗，部分细胞冻存备用。

抗0体产生快，抗0体滴度高，抗0体亲合力高。以标准免0疫程序为例，无论是用于单克0隆还是多克0隆抗0体制备，cpg佐剂，只需要在三周内进行两针免0疫，通常在第五周即可获得elisa滴

度（cutoff值为0.1000）高达1:10000-1:10000000的高亲合力抗0体水平。

不破坏抗原天然构象，从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克0隆抗0体，这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。

是水溶性佐剂，使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可免0疫动物。

使用肌肉免0疫途径，与常规小鼠单克0隆抗0体制备过程中使用足垫或脾内免0疫相比，极大方便了使用。

分类

1.生物性佐剂是细菌或其产物，其本身具有免0疫原性，如分枝杆0菌（结0核杆0菌、卡介苗）、短小棒状杆0菌、百0日咳杆0菌、革兰阴性杆0菌内毒0素等。此外发现粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-l、白细胞介素-2、干扰素-γ等的佐剂活性。2.无机佐剂如氢氧化铝、明矾、磷酸铝等。3.人工合成佐剂双链多聚肌苷酸、胞苷酸、双链多聚腺苷酸。4.油剂花生油乳化佐剂、矿物油、植物油、羊毛脂等。5.弗氏佐剂弗氏佐剂又分弗氏不完全佐剂和完全弗氏佐剂，是目前动物实验中zui常见的佐剂，但易在注射局部形成肉芽肿和持久性溃疡，因此不适用于人体使用。近年来，人工合成胞壁酰二肽作为卡介苗细胞壁中的一种成分，用于提高疫0苗的接种效果，是对人体无不良反应的有效佐剂。

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