spCas9 SpRY体外酶切试剂盒

产品简介：
    本产品主要用于spcas9 spry tu bian ti体外酶切实验和靶点筛选等实验。
    spcas9 tu bian tispry识别的pam序列为nrn（r为a/g）以及部分nyn（y为c/t），与yesheng型spcas9的pam序列ngg相比，极大的解除了pam的限制，可供选择的靶点更多。

本试剂盒可以在体外qie ge pcr产物、质粒等双链dna。
    试剂盒中提供了spcas9 tu bian tispry蛋白，反应缓冲液，以及对照sgrna和底物dna。使用该试剂盒可以快速开展体外酶切实验和筛选适合该 tu bianti的靶点。

 

活性定义：37℃，30分钟qie ge1ug 1kb dna双链定义为1个活性单位。
储存条件：-20℃冻存

实验步骤：
1、qie ge反应：
1.1需准备：底物dna，浓度大于100ng/ul；sgrna，浓度大于200ng/ul。
！务必采用无rna酶的耗材进行实验，注意防止rna酶污染。

按照下表配制spry体外切割反应缓冲液，请按表中顺序加入：

 阳性对照反应：

1.2吹吸混合均匀。

反应程序：
37℃ 30min
85℃ 10min

2、产物检测：
快速检测：

在反应体系中加入5μl cleaner，混匀。55℃孵育5min。（本步骤及以后的步骤不必使用无rna酶耗材操作）

取5μl进行凝胶电泳检测（不必加入dna loadingbuffer）。

 

3、阳性对照电泳结果：
阳性对照dna为760bp 双链dna。含有单一靶点。切割产物为两条带分别是505bp左右和255bp左右。 

m：dl2000 dna marker
1：spry蛋白不加grna切割30min
2：spry蛋白加grna1切割30min
3：spry蛋白加grna2切割30min
4：spry蛋白加grna3切割30min

产品保存和使用注意事项：

spry蛋白使用过程中尽量保持低温。

阳性对照sgrna需用无rna酶枪头取用，以免rnase污染导致降解。

若切割效果不理想，可提高sgrna的含量。

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