吴江区水体中大肠菌群检测分析

水体中大肠菌群检测分析：

　　实验原理

　　所谓大肠菌群，是指在37℃培养24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢杆菌的总称。主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。

　　水的大肠菌群数是指100ml水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群近似数（mpn）表示。在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢杆菌等多种细菌。这些细菌都可以随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。目前，国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指标。因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。

　　水中大肠菌群的检测方法，常用多管发酵法和滤膜法。多管发酵法可适用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要的时间较长。滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于堵塞滤孔的水样。

　　材料与器皿

　　(—)培养基

　　1、普通乳糖蛋白胨培养液

　　蛋白胨 10g，牛肉膏 3g，乳糖5g，氯化钠 5g，1.6％溴甲酚紫乙醇液 1.0ml，蒸馏水 1000ml，ph7.2~7.4。

　　将蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000ml蒸馏水中，调节ph为7.2~7.4，再加入1.6％溴甲酚紫乙醇液1.0ml，充分混匀，分装于有杜汉氏小管的试管中，每管10ml，115℃灭菌20min。

　　2、三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液

　　按上述普通乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制，分装于有杜汉氏小管的试管中，每管5ml。

　　1、 品红亚硫酸钠培养基（供平板分离用）

　　蛋白胨 10g， 乳糖 10g，k2hpo4 3.5g，琼脂 15～20g，蒸馏水1000ml，无水亚硫酸钠5g，5％的碱性品红乙醇溶液 20ml，ph 7.2~7.4。

　　4、伊红美蓝培养基（emb培养基）（供发酵法平板分离用，3和4可任选一种）

　　蛋白胨10g，乳糖10g，k2hpo4 2.0g，琼脂20g，蒸馏水1000ml，2％伊红（曙红）水溶液20ml，5％美蓝（亚甲蓝）水溶液13ml，ph 7.2~7.4。

　　(二)灭菌移液管、灭菌稀释水、试管、杜汉氏小管、革兰氏染色液、灭菌培养皿。

　　实验过程

　　(一)水样的采集

　　供细菌学检验的水样，必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证再运送、贮存过程中不受污染。水样从采集到检验不应超过4h，在0～4℃下保存不应超过24h ，如不能在4h 内分析，应在检验报告上注明保存时间和条件。

　　1、自来水取样：应在水龙头打开放水5min，再用无菌容器接取水样，待分析。如水样内含有余氯，则采样瓶灭菌后按每500ml水样加3％na2s2o3.5h2o溶液1ml。

　　2、江、河、湖、池自然水体取样：可用采样器，采样瓶应先灭菌。采样后，瓶内应留有空隙。如果与其他化验项目联合取样，细菌学分析水样应采在其他样品之前。

　　（二）初发酵试验

　　1、水样稀释：制备水样10-1、10-2的稀释液，方法为用无菌移液管吸取水样10ml放于盛有90ml无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡使混合均匀，并使其中的细菌尽量呈单个存在，即为10-1稀释液；再从10-1制备10-2稀释液。以此类推，稀释到所需倍数。

　　2、接种和培养：以无菌操作于5支三倍浓缩培养基（接种前一定应先检查杜汉氏小管内有无气泡）中各加入水样10ml，5支普通培养基试管中加入水样1ml，5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1ml，小心混匀放入37℃培养箱中培养24h 。此即5管法。

　　3、结果观察：37℃中培养24h后取出观察，观察有无气体（杜汉氏小管内有无气体）和酸产生（培养基有无变色）。在48h之间，培养管内倒置的杜汉氏小管内有任何量的气体积累，或培养基颜色从紫色变为黄色，便可初步断定为阳性反应。

　　若实验所测定的15支管中均为阳性反应，说明浓水样污染严重，可将样品进一步稀释后，再按上述方法接种、培养和观察。